一株耐酸耐胆盐的海洋德氏乳杆菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株耐酸耐胆盐的海洋德氏乳杆菌菌株及其应用。德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp)，所述德氏乳杆菌菌株于2022年11月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址为广州，保藏编号为GDMCCNo：62998。本发明专利技术还提供了一株德氏乳杆菌在表达耐酸性和耐胆盐能力中的应用，本发明专利技术中的德氏乳杆菌易培养，由德氏乳杆菌耐酸性和耐胆盐能力较强。杆菌耐酸性和耐胆盐能力较强。杆菌耐酸性和耐胆盐能力较强。

【技术实现步骤摘要】
一株耐酸耐胆盐的海洋德氏乳杆菌菌株及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体而言，涉及一株耐酸耐胆盐的海洋德氏乳杆菌菌株。

技术介绍

[0002]德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp)，是革兰氏阳性菌,菌体长2～9μm,用次甲基蓝染色可显示胞内颗粒,不运动。徳氏乳杆菌属同型发酵乳酸菌,简称保加利亚乳杆菌，是乳杆菌属的模式种，在发酵过程中可经同型乳酸发酵将乳糖转化为乳酸，并且将蛋白质降解为肽类和氨基酸，为乳制品提供了独特的质地、风味，同时赋予乳制品特殊的食疗功效，也提高了乳制品功能特性以及营养价值。
[0003]益生菌制成的食物,可维持人肠道微生物系统的平衡,有利于人的健康长寿,乳酸杆菌作为益生菌的重要成员,它具有许多益生作用,如调节免疫系统、肠道菌群和降低胆固醇等。而且,乳酸细菌普遍认为是安全的(GRAS),作为食品发酵剂已有很长使用的历史。德氏乳杆菌保加利亚亚种是工业生产发酵乳制品最主要的酸乳发酵剂菌种之一，筛选出具有优良发酵性能的德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株具有潜在的经济价值，对乳酸菌资源的开发利用具有重要的战略意义。本专利技术筛选的德氏乳杆菌，并评价其生物学活性，以期为益生菌的开发和利用提供候选菌株。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题之一是提供一株耐酸耐胆盐的海洋德氏乳杆菌菌株(Lactobacillus delbrueckii subsp)，所述德氏乳杆菌菌株于2022年11月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址为广州，保藏编号为GDMCCNo：62998。
[0005]可选地，所述德氏乳杆菌DNA序列为SEQ ID NO.1。
[0006]可选地，所述德氏乳杆菌是从海南滩涂的海水中分离得到的。
[0007]本专利技术要解决的技术问题之二是提供一株耐酸耐胆盐的海洋德氏乳杆菌菌株。
[0008]与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
[0009]1、本专利技术分离和鉴定了一株德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp)，通过基因组序列分析和构建系统发育树，确定该菌株为德氏乳杆菌。
[0010]2、与现有技术相比，本专利技术中的德氏乳杆菌易培养，由德氏乳杆菌表达耐酸耐胆盐的活性较高。
附图说明
[0011]图1为本专利技术实施例1中菌株XNY20253的菌落图；
[0012]图2为本专利技术实施例1中菌株XNY20253的镜检图；
[0013]图3为本专利技术实施例2中菌株XNY20253的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图；
[0014]图4为本专利技术实施例2中菌株XNY20253的系统发育树；
[0015]图5为本专利技术实施例3中菌株XNY20253在pH2.5、pH3.5环境中的耐受性；
[0016]图6为本专利技术实施例3中菌株XNY20253在1.5g/L胆盐环境中的耐受性。
具体实施方式
[0017]下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。
[0018]实施例1德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp)菌株的获得。
[0019]1、培养基的配制
[0020]培养基(g/L)：MRS培养基
[0021]2、菌株的筛选
[0022]将从海南海边滩涂采集了一些海水样本，并将采集的样本逐一进行培养，梯度稀释后涂布于MRS平板培养基中，对应的平板分别编号，将平板置于37℃恒温培养箱厌氧培养24h，挑选长势较好的单菌落，将挑出的单菌落分别接到试管上中再次培养，进行保菌。菌落轮廓明显，颜色偏白色(如图1，2)。
[0023]实施例2德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp)菌株的基因序列分析
[0024]1.真菌DNA基因组提取
[0025]取实施例1得到的菌株培养液，离心后取沉淀，用CTAB法进行16srDNA提取。
[0026]2.对该菌株进行16S rDNA的PCR扩增：
[0027]PCR扩增：引物515F和806R进行PCR扩增，515F序列为5
′‑
GTGYCAGCMGCCGCGGTAA
‑3′
，806R序列为5
′‑
GGACTACNVGGGTWTCTAAT
‑3′
。PCR反应体系为：TAQ酶25μL，515F引物2μL，806R引物2μL，DNA模板5μL，无菌水16μL。PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性60s，48℃退火60s，72℃延伸60s，28个循环；72℃延伸7min，4℃终止反应。凝胶电泳及PCR产物胶回收：PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定。利用快捷型琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司)对目的PCR产物进行回收纯化，进行16SrDNA测序。PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定(如图3)。观察是否扩增出目的条带。
[0028]3.16S rDNA测序与同源性分析
[0029]利用快捷型琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司)对目的PCR产物进行回收纯化，将纯化后的PCR产物送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序，基因序列如SEQ ID NO：1所示。将测得的序列提交美国NCBI的GENBANK获取相似序列，通过BLAST工具和DNAMAN软件进行对比分析并以Neighbor
‑
Joining方法构建系统发育树，如图4所示。
[0030]通过系统发育树发现该菌株与Lactobacillus delbrueckii subsp相似，因此可确定为一株海洋来源的德氏乳杆菌，我们将其命名为Lactobacillus delbrueckii subsp XNY20253。
[0031]由上述筛选得到的德氏乳杆菌菌株，命名为德氏乳杆菌菌株(Lactobacillus delbrueckii subsp)，菌株编号XNY20253，其保藏日期为2022年11月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址为广州，保藏编号为GDMCCNo：62998。
[0032]实施例3德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp)菌株表达的耐酸耐胆盐能力
[0033]将发酵液于4 000r/min、4℃条件下离心3min，弃上清液，PBS洗涤菌体2次，以1％的量接种于pH值分别为2.5、3.5的MRS培养液中，37℃厌氧培养，分别于0、3、6h取样，用平板计数法进行活菌计数。如图5所示0h活菌数对数值均在6.5以上,3h后活菌数有所下降,但其活本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp)，其特征在于：所述德氏乳杆菌菌株于2022年11月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址为广州，保藏编号为GDMCCNo：62998。2.根据权利要求1所述的一株德氏乳杆菌，其特征在于：所述德氏乳杆菌DNA序列为...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁慧，田健，诸辉，贾洪颖，叶宇昂，
申请(专利权)人：宁波希诺亚海洋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：