一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌在化妆品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌在化妆品中的应用，具体涉及生物技术领域。所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌（Akk）在制备化妆品中的应用，所述应用于化妆品中的嗜粘蛋白阿克曼氏菌为灭活嗜粘蛋白阿克曼氏菌细胞制剂、嗜粘蛋白阿克曼氏菌冻干粉或嗜粘蛋白阿克曼氏菌溶胞产物。本发明专利技术制备的灭活Akk细胞、细胞抽提物均具有促进角质细胞更新、促进皮肤抗菌肽分泌、促进角化相关蛋白表达、增强胞间连接、促进胶原蛋白等真皮胞外基质蛋白表达的效果，可以作为一种功效原料添加到护肤品中。为一种功效原料添加到护肤品中。为一种功效原料添加到护肤品中。

【技术实现步骤摘要】
一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌在化妆品中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌在化妆品中的应用。

技术介绍

[0002]人体细胞从最初的受精卵分化为形态和功能各异的各类组织细胞，但仍保留着一些共性，例如细胞表面的Toll样受体（TLR）、ABC型转运蛋白、G蛋白偶联受体、酪氨酸激酶受体等，为功能性成分的跨行业应用提供了细胞和分子层面的基础。
[0003]双歧杆菌（Bifidobacterium）和乳酸杆菌（Lactobacillus）是常用的肠道益生菌，具有促进消化、提高免疫力、减少过敏性疾病、促进损伤修复、降低血压等多种生理功能。其作用机制之一是菌体表面成分，如肽聚糖、表面蛋白等，与人体细胞表面受体发生结合后，调控ILs等免疫因子表达，通过下游级联途径发挥作用。由于人体细胞层面的共性，靶向肠道的双歧杆菌等益生菌在皮肤护理领域也得到应用，最早的例子是1982年雅诗兰黛推出的Estee Lauder Night Repair Cellular Recovery Complex，俗称小棕瓶，将双歧杆菌细胞裂解物（国内化妆法规中名称为“二裂酵母发酵产物溶胞产物”）作为创新性原料添加来实现功效上的创新，在作用机制和功效上，该原料中的双歧杆菌菌体成分可以与皮肤细胞表面的TLR受体结合，刺激细胞表达IL
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12，平衡紫外线照射导致的IL
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10增多和损伤修复酶系的减少，促进皮肤细胞紫外损伤的修复。数十年来有众多生产商推出了大量基于双歧杆菌、乳酸杆菌等益生菌的功能性皮肤护理原料，功能涵盖抗衰老、美白祛斑、改善皮肤菌群、屏障修复等多种功能，市场已进入竞争激烈的瓶颈期。
[0004]近年来随着培养和测序分析技术的发展，对肠道菌群组成和益生菌的认识有重大突破。严格厌氧的Bacteroides、Faecalibacterium、Akkermansia属等细菌具有发酵膳食纤维产生短链脂肪酸、代谢胆汁酸、通过膜蛋白/外周蛋白调节肠道免疫等作用，最终通过“肠
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X”轴调节机体代谢和状态，具有维持或促进健康、改善代谢性疾病的作用，被认为是继双歧杆菌/乳酸杆菌之后的新一代益生菌，以口服形式在改善肠道菌群上已得到初步应用。但该类微生物在皮肤护理领域的应用尚未见报道。
[0005]在新一代益生菌中，Akkermansia muciniphila（嗜粘蛋白阿克曼氏菌，以下简称Akk）是研究热点之一。Akk于2004年从人类粪便中分离培养出来，该菌是人类肠道共生菌。Akk的特别之处在于该菌依赖肠粘液层的黏蛋白生存，与大多数益生菌不同，它几乎不依赖于食物中的营养，即使消化道中没有营养物质，它也会以肠粘膜层中的粘蛋白为食。Akk高度适应粘蛋白降解的生存方式，基因组分析显示具有多种适合利用粘蛋白寡糖中的特殊糖类的酶，如唾液酸酶、岩藻糖苷酶、硫酸酯酶，表明宿主动物和AKK菌之间的共同进化进入了特化的高级阶段，并暗示Akk所在的疣微菌门对宿主的潜在功能意义。
[0006]Akk分泌的囊泡通过与结肠上皮细胞TLR受体结合及调节紧密连接蛋白的表达等来维持肠道稳态，可降低TLR4的表达，进而调节NF
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κB通路，减少促炎因子IL
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6、IL
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8的分泌。Akk产生的丁酸可以促进Treg细胞的外周活化，增加结肠中Treg细胞亚群的数量，抑制
促炎免疫细胞CD4＋T、CD8＋T淋巴细胞活性，最终表现为改善肠道炎症性疾病的效果。
[0007]虽然Akk是一种粘蛋白降解菌，但是通过促进分泌型肠上皮细胞（ISC）的分化，反而增加了粘蛋白的产生，Akk以短链脂肪酸受体Gpr41/43 途径依赖性方式增强了ISC 增殖，加速肠上皮再生，促进肠上皮细胞发育并维持肠道稳态。在动物模型中，Akk补充剂提高了产生粘蛋白的杯状细胞的数量，使结肠粘液层的厚度增加了大约 3 倍，显著优于植物乳杆菌。在体外测试中Akk通过直接与肠细胞结合来改善肠细胞单层完整性。
[0008]另有多样研究证实口服活性Akk具有改善糖尿病和血糖水平、改善酒精性肝病、改善肥胖、改善神经退行性疾病、降低血中炎症因子水平、作为肿瘤免疫治疗辅助剂等多种生理功能。
[0009]但将Akk应用于化妆品中，并未见有报道。

技术实现思路

[0010]为此，本专利技术提供一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌在化妆品中的应用，以填补现未有Akk应用于化妆品中的空白。
[0011]Akk的健康作用机制尚未完全清楚，除丁酸等代谢产物外，已发现Akk细胞外的菌毛样结构蛋白（Amuc_1100）具有多种有益生理功能，Akk的细胞膜蛋白、分泌的细胞外蛋白也被证实具有有益作用。已有数项研究证实口服热灭活的Akk细胞也具有改善肥胖的效果。以上结果表明Akk的菌体成分，而非完整的活性细胞，也具有期望的生理功能，为Akk细胞产物的利用提供了启示。
[0012]考虑到肠道环境与皮肤环境的差异，来自肠道的严格厌氧微生物在与空气接触的皮肤表面难以存活，因此使用灭活形态的细胞制剂更适宜环境要求，对制剂保存也更为方便。开发非活性的、基于Akk细胞或细胞成分的护肤品原料有利于扩宽新一代益生菌的应用领域、提升产品层次、促进产业发展和跨界融合。
[0013]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0014]根据本专利技术的一方面提供的一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌在制备化妆品中的应用；所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌是分离于健康成年人新鲜粪便；
[0015]所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的是通过菌株的厌氧细胞培养和收集获得；具体为保存菌株接种至50ml细胞培养液中，厌氧条件下37℃培养48小时，可观察到培养液明显变浑浊，按2%体积比接种至新的细胞培养液中，厌氧条件下37℃培养72小时，取样测量OD 600nm下浊度值并梯度稀释培养计数，细胞数量达到1
×
10
10
CFU/ml以上后。将培养液在5000rpm、20分钟下离心，倾去上清液，收集细胞，备用。
[0016]进一步的，所述应用于化妆品中的嗜粘蛋白阿克曼氏菌为灭活嗜粘蛋白阿克曼氏菌细胞制剂、嗜粘蛋白阿克曼氏菌冻干粉或嗜粘蛋白阿克曼氏菌溶胞产物；
[0017]所述灭活嗜粘蛋白阿克曼氏菌细胞制剂是以1.0%质量比悬浮在pH7.0
±
0.5、0.01M的精氨酸
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柠檬酸缓冲液中，搅拌20分钟使细胞均匀分散，将其放置在80
±
5℃水浴中保温20分钟获得；
[0018]所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌冻干粉在发酵容器中直接加热升温至80
±
5℃保温10分钟使细胞热灭活，冷却至室温后将培养液在5000rpm、20分钟下离心，倾去上清液，收集细胞，加入与细胞等重量的冻干保护液混合均匀，冷冻干燥后粉碎，得到固体粉末形态的灭活
细胞制剂；
[0019]所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌溶胞产物是以1.0%质量比悬浮在pH=7.0...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌在制备化妆品中的应用；所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌是分离于健康成年人新鲜粪便；所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的是通过菌株的厌氧细胞培养和收集获得；具体为保存菌株接种至50ml细胞培养液中，厌氧条件下37℃培养48小时，可观察到培养液明显变浑浊，按2%体积比接种至新的细胞培养液中，厌氧条件下37℃培养72小时，取样测量OD 600nm下浊度值并梯度稀释培养计数，细胞数量达到1
×
10
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CFU/ml以上后。将培养液在5000rpm、20分钟下离心，倾去上清液，收集细胞，备用。2.根据权利要求1所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌在制备化妆品中的应用，其特征在于，所述应用于化妆品中的嗜粘蛋白阿克曼氏菌为灭活嗜粘蛋白阿克曼氏菌细胞制剂、嗜粘蛋白阿克曼氏菌冻干粉或嗜粘蛋白阿克曼氏菌溶胞产物；所述灭活嗜粘蛋白阿克曼氏菌细胞制剂是以1.0%质量比悬浮在pH7.0
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0.5、0.01M的精氨酸
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柠檬酸缓冲液中，搅拌20分钟使细胞均匀分散，将其放置在80
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5℃水浴中保温20分钟获得；所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌冻干粉在发酵容器中直接加热升温至80
±
5℃保温10分钟使细胞热灭活，冷却至室温后将培养液在5000rpm、20分钟下离心，倾去上清液，收集细胞，加入与细胞等重量的冻干保护液混合均匀，冷冻...

【专利技术属性】
技术研发人员：马凯，
申请(专利权)人：苏州益优生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：