一种具有修复淡斑功能的细胞活性成分原材料制备方法技术

本发明专利技术提供一种具有修复淡斑功能的细胞活性成分原材料制备方法，属于化妆品原材料领域，其先从人脐带组织中提取华通氏胶，再对华通氏胶进行细胞增殖培养，最后对增殖培养得到的脐带间充质干细胞进行冻融裂解，收集细胞裂解物即为原材料成品，本发明专利技术提供的方法采用人脐带作为提取原料，充分利用医疗废物，原料容易获取，且能降低生产成本；同时，制备方法采用细胞冻融裂解配合离心过滤，能保证细胞物质的活性，提升最终化妆品成品的质量，保证修复淡斑的效果。斑的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种具有修复淡斑功能的细胞活性成分原材料制备方法


[0001]本专利技术属于化妆品原材料领域，具体涉及一种具有修复淡斑功能的细胞活性成分原材料制备方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是一类起源于早期中胚层，并且能够自我更新和具有多向分化潜能的成体干细胞，其来源丰富，可从脐带、脂肪、骨髓、牙髓中分离提取，并表现出旁分泌、免疫调节等多种功能。间充质干细胞被认为是细胞治疗最具应用前景的种子细胞，目前间充质干细胞的提取物可以作为化妆品的原材料，具有修复淡斑功能。
[0003]脐带中的干细胞含量较丰富，也最容易获得，脐带间充质干细胞来源于产妇产后的脐带组织，通常情况下是作为医疗废物丢弃的，从脐带组织中分离提取干细胞不存在伦理道德争议，应用前景广阔。近年来，从脐带间充质干细胞中提取有效物质多是采用超声波裂解或者机械高温裂解，但这两种方法都无法保证细胞的活性，更无法得以保证原材料修复淡斑的效果。

技术实现思路

[0004]基于现有技术中存在上述问题，本专利技术提供一种具有修复淡斑功能的细胞活性成分原材料制备方法，其先从人脐带组织中提取华通氏胶，再对华通氏胶进行细胞增殖培养，最后对增殖培养得到的脐带间充质干细胞进行冻融裂解，收集细胞裂解物即为成品，其包括以下详细步骤：
[0005]步骤S1，无菌采集人脐带组织，洗净脐带组织并从脐带组织中分离出华通氏胶；
[0006]步骤S2，将华通氏胶接种到液态的完全细胞培养基中进行脐带间充质干细胞的增殖培养，培养环境的二氧化碳浓度为5％，温度为37℃；
[0007]步骤S3，取增殖培养后获得的脐带间充质干细胞洗净，并将脐带间充质干细胞置于
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80℃中冷冻10
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16小时，再置于4℃的环境中解冻，重复本步骤一次；
[0008]步骤S4，取步骤S3中获得的细胞冻融液离心，取上清液过滤后得到成品细胞裂解物。
[0009]其中，所述的步骤S1中是采用生理盐水洗净脐带组织至液体清澈；步骤S1中还包括步骤S11，将脐带组织剪成2cm的小段，再将小段脐带组织中的血管剔除，再分离华通氏胶。
[0010]其中，所述的步骤S2中还包括步骤S21，将原代脐带间充质干细胞使用胰酶消化分离，再取分离后的脐带间充质干细胞以相同的培养条件进行传代培养。
[0011]其中，所述的步骤S3中采用生理盐水洗净增殖后的脐带间充质干细胞，再用生理盐水将脐带间充质干细胞定容至1000万个/ml，再进行细胞冻融裂解。
[0012]其中，所述的步骤S4中的离心是300g离心10分钟，取上清液用100um细胞过滤网过滤。
[0013]本专利技术的有益效果是：采用人脐带作为提取原料，充分利用医疗废物，原料容易获取，且能降低生产成本；同时，制备方法采用细胞冻融裂解配合离心过滤，能保证细胞物质的活性，提升最终化妆品成品的质量，保证修复淡斑的效果。
具体实施方式
[0014]下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案进行说明。
[0015]首先对脐带组织来源样本进行筛选，筛选条件包括供体的基本信息、既往病史、家族史等，另外检验筛查样本有无传染病，选择健康正常的样本作为组织供体。同时在实验室配制所需的试剂，包括：
[0016]保存液：无血清细胞培养基，低温4℃保存；
[0017]洗涤液：0.9％生理盐水；
[0018]完全培养基：2％血清替代物+1％L
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谷氨酰胺+500ml无血清细胞培养基；无血清细胞培养基可以采用常规的基础细胞培养基。
[0019]然后进行以下详细步骤：
[0020]步骤S1，在无菌条件下采集人脐带组织，转移至含保存液的无菌瓶内冷链运输，将脐带组织运输到实验室后转移至90mm平皿中，再加入洗涤液多次清洗，至洗涤液清澈为止。用剪刀将清洗干净的脐带的两端剪去，剩余的脐带剪成2cm左右的小段，再用洗涤液(生理盐水)重复对小段的脐带进行洗涤，直到洗涤液较清澈为止。
[0021]步骤S11，取出一小段脐带放到新的平皿中，按血管螺旋走势剔除脐带的两条动脉和一条静脉，再用组织镊将分离的华通氏胶撕下并放入到加有生理盐水的新平皿中，采用相同的方法把剩余脐带小段的华通氏胶分离出来。
[0022]步骤S2，将步骤S11中分离得到的华通氏胶按照0.5g/瓶的量接种到T75细胞培养瓶内，向培养瓶内添加少量完全培养基，再将培养瓶放置到二氧化碳培养箱内，温度设置为37℃，二氧化碳浓度5％；
[0023]步骤S2
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1，一日后，将培养瓶从二氧化碳培养箱中取出，用移液管吸取10ml完全培养液轻缓的转移到细胞瓶内，不要触碰已黏附的胶体，再轻轻将培养瓶平放入培养箱中继续培养。
[0024]步骤S2
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2，在培养的第六日，将培养瓶从二氧化碳培养箱中取出，用移液管从培养瓶中吸走5ml瓶内的培养液，然后再吸取5ml新的完全培养液轻缓的转移到培养瓶内，不要触碰已黏附的胶体，再轻轻将培养瓶平放入培养箱中继续培养。
[0025]步骤S2
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3，在培养的第十三日，将培养瓶从二氧化碳培养箱中取出，用移液管从培养瓶中吸走10ml瓶内培养液和全部胶体，然后再吸取10ml新的完全培养液轻缓的转移到细胞瓶内并将胶体转移回培养瓶中，再轻轻平放入培养箱中继续培养。
[0026]步骤S21，在培养的第十六日，将培养瓶取出并移入生物安全柜，移除瓶中的上清培养液，使用生理盐水对瓶内组织洗涤两次，用移液枪轻轻吹打，然后再向每个T75培养瓶中加入2.5ml的0.125％的胰酶
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EDTA，常温消化2分钟，再加入培养基5ml终止消化，用移液枪轻轻吹打，再将所有液体转移至离心管，300g离心10分钟，移除上清液后采用生理盐水进行冲洗，冲洗后将离心管内剩余的生理盐水及沉淀转移至新的离心管，采用生理盐水重悬后常温300g离心10分钟，移除上清液后重新加入完全培养基重悬沉淀并定容至5ml，轻轻吹
打后从离心管中取样计算离心管中细胞总数量，再按4.5
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105个/瓶的数量将离心管中的细胞接种到新的T75培养瓶中，将培养瓶放置于温度为37℃、CO2浓度为5％的恒湿恒温培养箱中进行传代培养，待传代培养的细胞融合度到80％以上时再次传代培养，依次得到P2代的细胞，待P2代的细胞达到细胞融合度为80％
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90％后再次传代，并依次得到各代次的细胞。
[0027]步骤S3，取增殖培养后获得的各批次脐带间充质干细胞，移除培养液后采用生理盐水洗涤2次，再采用生理盐水重悬并融合各批次的细胞，计算细胞数量，常温300g离心10min，移除上清液，再按照计数结果用生理盐水将细胞重悬并定容至1000万个/ml，再将细胞悬液置于
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80℃的冰箱中冷冻16小时，再置于4℃的环境中缓慢解冻，重复
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80℃冷冻和4℃解冻一次。
[0028]步骤S4，取步骤S3中获得的细胞冻本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有修复淡斑功能的细胞活性成分原材料制备方法，其特征在于，其先从人脐带组织中提取华通氏胶，再对华通氏胶进行细胞增殖培养，最后对增殖培养得到的脐带间充质干细胞进行冻融裂解，收集细胞裂解物即为成品。2.根据权利要求1所述的一种具有修复淡斑功能的细胞活性成分原材料制备方法，其特征在于，其包括以下详细步骤：步骤S1，无菌采集人脐带组织，洗净脐带组织并从脐带组织中分离出华通氏胶；步骤S2，将华通氏胶接种到液态的完全细胞培养基中进行脐带间充质干细胞的增殖培养，培养环境的二氧化碳浓度为5％，温度为37℃；步骤S3，取增殖培养后获得的脐带间充质干细胞洗净，并将脐带间充质干细胞置于
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80℃中冷冻10
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16小时，再置于4℃的环境中解冻，重复本步骤一次；步骤S4，取步骤S3中获得的细胞冻融液离心，取上清液过滤后得到成品细胞裂解物。3.根据权利要求2所述的一种具有修复淡斑...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈泽彬，
申请(专利权)人：深圳市领呈健康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：