一种检测微量蛋白的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种检测微量蛋白的试剂盒及方法。本发明专利技术中的试剂盒基于DNA串联合成技术和CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种检测微量蛋白的试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于免疫检测领域，具体涉及一种检测微量蛋白的试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]目前临床上应用的蛋白检测方法以辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、三联吡啶钌等代表的酶介导显色、化学发光、电化学发光方法为主。研究显示，这些蛋白检测方法的检测下限(LOD)仅为0.01
‑
50ng/mL，在检测低浓度靶蛋白时结果通常接近空白信号。近年来，建立针对微量蛋白的检测新技术逐渐成为研究的热点。
[0003]由于蛋白无法扩增，目前常用的策略是将蛋白信号转换为核酸信号，再利用核酸分子的可扩增性，借助聚合酶链式反应(PCR)或新型的恒温扩增方法进行扩增和信号放大，从而实现对低浓度靶蛋白的检测。其中以免疫PCR(Immuno
‑
PCR)作为代表，该技术是通过抗体标记DNA探针分子，联合抗原抗体反应和PCR扩增进行信号放大，显著提高了靶蛋白的检测灵敏度，检出限较ELISA提高了105倍以上，但是抗体共价标记DNA的步骤复杂耗时，并且强烈依赖于PCR仪等变温设备，限制了其广泛应用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测微量蛋白的试剂盒，包括：DNA探针、短串联重复序列、crRNA。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述短串联重复序列的5
’
端序列与DNA探针的反向序列互补，3
’
端以ACAACTTAAC序列作为串联重复单元；所述crRNA的识别序列与短串联重复序列部分互补。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA探针的序列如下所示：5
’‑
CAGTAGCTCATCTTTTTTTTTACGCAGTGTTCCTATAGTTCGATCCAG
‑3’
；所述短串联重复序列的序列如下所示：5
’‑
CTGGATCGAACTATAGGAACACTGCGTATTCAACTTAACACAACTTAACACAACTTAAC(ACAACTTAAC)
n
‑3’
；所述n＝200～500；所述crRNA序列如下所述：5
’‑
GGGUAAUUUCUACUAAGUGUAGAUUGUUAAGUUGUGUUAAGUUG
‑3’
。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括捕获抗体、检测抗体、链霉亲和素、金纳米颗粒、二硫苏糖醇、链霉亲和素磁珠、FnCas12a、荧光报告探针；优选地，所述荧光报告探针的序列如下所示：5
’‑
TTATT
‑3’
。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包含缓冲液，所述缓冲液包含：酶切缓冲液、洗涤缓冲液；优选地，所述酶切缓冲液为NEB 2.1。6.权利要求1～5任一项所述的试剂盒在检测微...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾木圣，刘万里，王域，冯国开，
申请(专利权)人：中山大学肿瘤防治中心中山大学附属肿瘤医院，中山大学肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：