一种与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法，所述与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原包括ST

【技术实现步骤摘要】
一种与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法。

技术介绍

[0002]蛋白质通过糖苷化反应进行翻译后修饰可形成O
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连接糖苷和N
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连接糖苷两种主要类别。相较于N
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连接糖苷，O
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连接糖苷的结构复杂性更为多样化。在众多的O
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连接糖苷中，N
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乙酰半乳糖胺(GalNAc)
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α
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O
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丝氨酸/苏氨酸是蛋白质O
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连接糖苷最为普遍的一种类型，通常被称为mucin型O
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糖苷。这类糖苷在高等植物和动物界中广泛存在。mucin型O
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糖苷在众多的生物进程中扮演着重要的角色，例如：调节细胞
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细胞间相互作用，影响蛋白质的稳定性、构象和结构，作为受体结合配体，参与细胞附着和免疫应答等。有意思的是，肿瘤细胞表面mucin型本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法，所述与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原包括ST
N
抗原、2,3 STF抗原、2,6 STF抗原、glycophorin血型糖蛋白和 cores 1
‑
8 mucin型O
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糖苷，其特征在于，以化合物16为共同中间体，通过与不同的糖基供体进行糖苷化反应即可集群式合成一系列肿瘤相关糖类抗原TACAs，所述化合物16结构为：。2.根据权利要求1所述的与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法，其特征在于，所述共同中间体16的预处理方法为：在氩气保护条件下，共同中间体16溶于干燥的吡啶/乙酸中，加入水合肼，薄层色谱监测反应完后，加入丙酮淬灭反应，用旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，硅胶柱层析纯化得到脱除Lev的产物44，所述脱除Lev的产物44的结构为：。3.根据权利要求2所述的与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法，其特征在于，所述糖苷化反应为：在氩气保护条件下，将脱除Lev的产物44和糖基供体溶解于干燥的二氯甲烷中，加入新干燥的3 Ǻ
分子筛，室温搅拌15 min后，降温至0 ℃、
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15 ℃或
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20 ℃，依次加入N
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碘代琥珀酰亚胺、三氟甲磺酸，逐渐升至室温或者维持在
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15 ℃、
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20 ℃反应，薄层色谱监测反应完后，加入三乙胺淬灭反应，用硅藻土过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到糖苷化产物；且，所述糖基供体包括化合物37
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40的结构式为：；所述产物包括化合物27
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30的结构式为：
。4.根据权利要求2所述的与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法，其特征在于，所述糖苷化反应为：将产物44溶解于干燥的四氢呋喃，室温条件下加入70%的氟化氢吡啶溶液，室温搅拌过夜，薄层色谱监测反应完后，加入缓慢三乙胺淬灭反应，反应液用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化即可得到合成34的受体，该受体与糖基供体38，在氩气保护条件下，溶解于干燥的二氯甲烷中，加入新干燥的3 Ǻ
分子筛，室温搅拌15 min后，降温至
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15 ℃，依次加入N
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碘代琥珀酰亚胺，三氟甲磺酸，
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15 ℃搅拌反应，薄层色谱监测反应完后，加入三乙胺淬灭反应，用硅藻土过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到糖苷化产物34；其中，糖苷化产物34的结构为：。5.根据权利要求1所述的与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法，其特征在于，所述糖苷化反应为：在氩气保护条件下，将化合物16溶解于干燥的四氢呋喃，室温条件下加入70%的氟化氢吡啶溶液，室温搅拌过夜，薄层色谱监测反应完后，加入缓慢三乙胺淬灭反应，反应液用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化即可得到合成化合物31和35的受体，该受体与糖基供体38或41，在氩气保护条件下，溶解于干燥的二氯甲烷中，加入新干燥的3 Ǻ
分子筛，室温搅拌15 min后，降温至0 ℃或
‑
40 ℃，依次加入N
‑
碘代琥珀酰亚胺、三氟甲磺酸，逐渐升至室温反应或维持
‑
40 ℃，薄层色谱监测反应完后，加入三乙胺淬灭反应，用硅藻土过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到糖苷化产物31和35；其中，糖基供体41的结构式
为：；化合物31和35的结构为：。6.根据权利要求1所述的与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法，其特征在于，还包括迭代糖苷化反应，所述迭代糖苷化反应包括：在氩气保护条件下，将糖苷化产物27溶解于干燥的四氢呋喃，室温条件下加入70%的氟化氢吡啶溶液，室温搅拌过夜，薄层色谱监测反应完后，加入缓慢三乙胺淬灭反应，反应液用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化即可得到合成33和36的受体，该受体分别与糖基供体38和41反应，在氩气保护条件下，溶解于干燥的二氯甲烷中，加入新干燥的3 Ǻ
分子筛，室温搅拌15 min后，降温至0 ℃或
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40 ℃，依次加入N
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碘代琥珀酰亚胺、三氟甲磺酸，逐渐升至室温或维持在
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40 ℃反应，薄层色谱监测反应完后，加入三乙胺淬灭反应，用硅藻土过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到糖苷化产物33和36，其中，糖苷化产物33和36的结构为：；或，在氩气保护条件下，将化合物16溶解于干燥的四氢呋喃，室温条件下加入70%的氟化氢吡啶溶液，室温搅拌过夜，薄层色谱监测反应完后，加入缓慢三乙胺淬灭反应，反应液用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化即可得到合成化合物32的受体，在氩气保护条件下，将所述受体与糖基供体22a，溶于干燥的二氯甲烷中，依次加入新干燥的3 Ǻ
分子筛、三苯基
氧化磷，室温搅拌15 min后，加入碘代三甲硅烷，室温搅拌反应3天后，加入饱和硫代硫酸钠淬灭反应，用二氯甲烷萃取三次，所得有机相用饱和氯化钠洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化即可得到糖苷化产物32，其中，糖基供体22a和糖苷化产物32的结构式分别为：22a和糖苷化产物32的结构式分别为：。7.根据权利要求1所述的与粘蛋白相关肿瘤相关糖类抗原的集成合成方法，其特征在于，还包括基团处理，所述基团处理包括：在氩气保护条件下，将糖苷化产物27、29和30分别用吡啶溶解，再滴加硫代乙酸，室温反应过夜，薄层色谱监测反应完全，将反应液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到叠氮转化为乙酰氨基的中间体；将所述叠氮转化为乙酰氨基的中间体溶解于干燥的四氢呋喃，室温条件下加入70%的氟化氢吡啶溶液，室温搅拌过夜，薄层色谱监测反应完后，加入缓慢三乙胺淬灭反应，反应液用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化即可得到脱除硅基的中间体；将所述脱除硅基的中间体用甲醇溶解，再依次加入1/10水、1/100冰乙酸、10%钯碳，在反应体系中通入氢气，室温搅拌反应12h，薄层色谱监测反应完全，将反应液用直径25 mm 聚醚砜微孔滤膜过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，反相RP
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18柱层析纯化得到氢化后的中间体；在氩气保护条件下，将所述氢化后的中间体用甲醇溶解，再依次加入1,4
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二氧六环、1M 氢氧化钠水溶液，室温反应过夜，薄层色谱监测反应完全；用冰乙酸调节反应溶液至pH=7, 反应溶液用旋转蒸发仪浓缩，凝胶柱层析纯化得到白色固体 2、6和9即为糖类抗原core 1、core 5、core 8；或，在氩气保护条件下，将糖苷化产物28溶解于甲醇/醋酸/二氯甲烷溶液，室温条件下加入锌粉反应，薄层色谱监测反应完全；硅藻土过滤, 滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到叠氮转化成氨基及脱除氯甲酸三氯乙酰基的中间体；在氩气保护条件下，将所述叠氮转化成氨基及脱除氯甲酸三氯乙酰基的中间体溶解于吡啶，缓慢加入乙酸酐，室温搅拌反应，薄层色谱监测反应完全；反应液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到氨基乙酰化的中间体；将所述氨基乙酰化的中间体溶解于干燥的四氢呋喃，室温条件下加入70%的氟化氢吡啶溶液，室温搅拌过夜，薄层色谱监测反应完后，加入缓慢三乙胺淬灭反应，反应液用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化即可得到脱除叔丁基二苯基硅基的中间体；将所述脱除叔丁基二苯基硅基的中间体用甲醇溶解，再依次加入1/10水、1/100冰乙酸、10%钯碳，在反应体系中通入氢气，室温搅拌反应12 h，薄层...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖国志，张云琴，首坤秀，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：