一种基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白及其制备方法和应用，所述多功能蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。与现有技术相比，本发明专利技术中的基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白同时具有黏附特性和酯酶特性，其中，通过黏附特性能够提高乳酸菌对胃肠道的黏附率，从而提升乳酸菌在肠道的定植特性，为乳酸菌的肠道益生功能提供基础，而通过其酯酶活性，能够协助完成牛乳脂质的水解作用，促进脂肪分解，产生更多优质的脂肪酸。产生更多优质的脂肪酸。产生更多优质的脂肪酸。

【技术实现步骤摘要】
一种基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]乳酸菌是一类可以发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌，它是人体肠道中有益于宿主健康的优势菌群，在健康维护中发挥着重要作用，被广泛地用于益生菌制剂的制造。表面蛋白是细菌细胞壁最外层的组成部分，占细菌细胞总蛋白质的10
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15％。乳酸菌表面蛋白具有多种功能特性，如细胞保护、维持细胞形态、细胞壁代谢、营养物质的降解和摄取、与底物或宿主的通讯和结合、黏附和聚集等特性。除此之外，乳酸菌表面蛋白还有助于乳酸菌抵抗胃肠道中消化酶、酸，治疗胃肠道疾病。乳酸菌表面蛋白的这些潜在的功能特性，为其发挥益生作用打下基础。
[0003]目前，对于表面蛋白的研究主要集中于它的黏附特性，而乳酸菌中的表面蛋白不仅是用于聚集的唯一细胞表面结构，而且对肠道组织黏附以及其他一些功能元件也起着重要作用。LPxTG结构蛋白是乳杆菌表层蛋白中一类重要的蛋白，研究发现其在增强乳杆菌肠道黏附及耐受特性方面发挥着重要的协助作用。当LPxTG结构蛋白在胞内表达并分泌锚定胞外细胞壁的过程中，苏氨酸和甘氨酸(TG)之间的肽键被管家细胞壁分选酶酶切，然后暴露的苏氨酸末端与肽聚糖肽桥结构中的氨基酸催化形成肽键，从而使其锚定在细胞壁肽聚糖上发挥作用。通过LPxTG结构蛋白的辅助黏附作用，将大大提升乳杆菌在宿主肠道中的定植特性。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的第一个技术问题是针对现有技术而提供一种同时具有黏附特性和酯酶特性的基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白。
[0005]本专利技术所要解决的第二个技术问题是针对现有技术而提供一种编码上述基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白的核酸。
[0006]本专利技术所要解决的第三个技术问题是针对现有技术而提供一种含有上述核酸的重组表达载体。
[0007]本专利技术所要解决的第四个技术问题是针对现有技术而提供一种含有上述重组表达载体的重组工程菌。
[0008]本专利技术所要解决的第五个技术问题是针对现有技术而提供一种上述基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白的制备方法。
[0009]本专利技术所要解决的第六个技术问题是针对现有技术而提供一种上述基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白在乳制品制备中的应用。
[0010]本专利技术解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种基于乳酸菌表面
LPxTG结构的多功能蛋白，其特征在于，所述多功能蛋白的氨基酸序列如下所述：
[0011]DMTGTTVNGETAHSNVTPMVQTNKDEASTPQTTTDWSDLAKYQNDIPVQILGINDLHGGLETTGSATIGDKTYSNAGTVARLAGNLDAAEESFKNANPTGTSIRVEAGDMVGASPANSALLQDESTMHALDAMHFEIGTLGNHEFDEGLAEYMRIVNGGEPTKQYNEAEMAYPHVKTGINIITANVVNKSDGQIPFGMQPYLIKEIHTSDGKVARIGFIGIEITSLPILTLYDNYKDYDVLDEAETIAKYDQILRKKGVNAIVVLAHTGVSTDKDGSTKGNAVDIIKKLYQIDPDNSVDLYVAGHSHQYANATVGSVKLVQAIYTGKAYDDIIGYIDPTTN。
[0012]本专利技术解决上述第二个技术问题所采用的技术方案为：一种编码如上所述的基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白的核酸，其特征在于通过以下步骤获得：
[0013]以罗伊氏乳杆菌SH
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23的全基因组为模版，通过引物1
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LPxTG
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F/R，经PCR扩增获得，其中罗伊氏乳杆菌SH
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23的全基因组核苷酸序列为：GATATGACTGGGACAACAGTTAATGGTGAAACTGCCCATAGCAATGTTACGCCAATGGTCCAGACTAATAAGGATGAAGCAAGTACTCCGCAAACGACTACTGATTGGTCTGACCTAGCCAAATATCAAAATGACATTCCAGTTCAGATTTTAGGAATCAATGACCTGCATGGTGGGTTAGAAACCACTGGATCAGCTACGATTGGAGATAAGACGTATTCGAATGCCGGAACAGTTGCACGCCTAGCTGGTAACCTTGATGCGGCAGAGGAAAGTTTTAAGAACGCTAATCCGACAGGAACCTCAATTCGGGTAGAAGCCGGAGATATGGTTGGGGCTTCTCCAGCAAATTCTGCTCTTCTTCAAGACGAATCAACTATGCATGCTTTAGACGCAATGCATTTTGAAATAGGAACTTTGGGAAACCATGAGTTTGATGAAGGTTTAGCTGAGTATATGCGGATTGTTAATGGTGGTGAACCTACTAAACAATATAATGAAGCTGAGATGGCCTATCCTCATGTGAAAACAGGGATTAATATCATTACTGCCAATGTTGTAAATAAATCTGATGGTCAAATCCCATTTGGAATGCAACCATACTTGATTAAAGAAATTCATACTAGTGATGGTAAAGTTGCTCGGATTGGCTTTATTGGGATTGAAATTACTTCCCTACCAATTTTAACCTTATACGATAATTACAAAGATTATGATGTTTTAGACGAGGCTGAAACAATTGCAAAATATGATCAAATTTTACGTAAAAAGGGTGTTAATGCAATTGTAGTTCTTGCCCATACAGGGGTTTCAACGGATAAAGATGGCAGCACTAAAGGTAATGCTGTTGATATCATTAAGAAGCTTTACCAAATTGACCCTGATAATTCTGTCGACCTTTATGTTGCCGGTCACTCCCACCAATATGCTAATGCTACTGTTGGTAGTGTAAAATTAGTGCAAGCCATTTACACAGGTAAGGCTTACGATGATATTATCGGTTACATCGATCCAACAACTAAT。
[0014]引物1
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LPXTG
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F：gtggtggtggtggtgctcgagGATATGACTGGGACAACAGTTAATGG；
[0015]引物1
‑
LPXTG
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R：cagcaaatgggtcgcggatccTTAAGCATGTTTACGCTTGCGA。
[0016]本专利技术解决上述第三个技术问题所采用的技术方案为：一种含有如上所述的核酸的重组表达载体。
[0017]进一步，本专利技术中上述重组表达载体包括pET
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白，其特征在于，所述多功能蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。2.一种编码如权利要求1所述的基于乳酸菌表面LPxTG结构的多功能蛋白的核酸，其特征在于，所述核酸通过以下步骤获得：以罗伊氏乳杆菌SH
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23的全基因组为模版，通过引物1
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LPxTG
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F/R，经PCR扩增获得，其中，引物1
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LPxTG
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F/R的核苷酸序列分别如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。3.一种含有如权利要求2所述的核酸的重组表达载体。4.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括pET
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28a质粒。5.一种含有如权利要求2所述的核酸或权利要求3、4任一项所述的重组表达载体的重组工程菌。6.如权利要求5所述的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌为含有pE...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴振，叶倩文，潘道东，劳立峰，孙杨赢，夏强，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：