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高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒制造技术

技术编号：37981179 阅读：5 留言：0更新日期：2023-06-30 09:56

本发明专利技术涉及一种高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒，在检测红细胞中叶酸及其代谢物的含量，解决了对红细胞定量的难题，整个待测样本的前处理过程简单，灵敏度高，样本用量小，特异性强，7.0分钟之内可同时检测红细胞中5种叶酸及其代谢物，可用于临床上红细胞中5种叶酸及其代谢物的诊断及健康评估。健康评估。健康评估。

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【技术实现步骤摘要】
高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒

[0001]本专利技术属于血液检测
，具体涉及一种高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒，以及该试剂盒在利用高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的应用，其中，叶酸及其代谢物分别为：叶酸、5
‑
甲基四氢叶酸、5
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甲酰四氢叶酸、黄素腺嘌呤二核苷酸和维生素B3。

技术介绍

[0002]叶酸(VB9)是一种不耐热、低密度的水溶性B族维生素，参与核酸、氨基酸、蛋白质及磷脂的代谢，与细胞分化、倍增及其功能密切相关，人体不能合成和转化，必须在食物中获得。育龄妇女适量补充叶酸，可以降低胎儿神经管畸形、21
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三体综合征、唇腭裂、心脏病、白血病的发病率，降低孕妇发生流产的可能性。红细胞叶酸是衡量机体叶酸营养状况最常用的指标。叶酸在红细胞中主要以多聚谷氨酸(1
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7个谷氨酸)的形式存在，在血浆中γ
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谷氨酰水解酶的作用下，向血清中释放活性单谷氨酸形式，因此红细胞叶酸检测能用于评估人体叶酸储备，而将红细胞叶酸多聚谷氨酸形式充分转化成单谷氨酸化合物也成了红细胞叶酸检测的关键。
[0003]黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD，维生素B2在体内的活性形式)、维生素B3(VB3)这两种物质在叶酸代谢通路中也都起到相应的辅助作用，同时测量可以帮助临床更全面的分析叶酸的代谢情况。但是目前能单次同时检测叶酸，FAD和VB3的方法未见文献报道。因此，如果需要同时了解患者红细胞中

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒，其特征在于，所述叶酸及其代谢物分别为：叶酸、5
‑
甲基四氢叶酸、5
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甲酰四氢叶酸、黄素腺嘌呤二核苷酸和维生素B3；上述叶酸及其代谢物对应的同位素内标物分别为：叶酸
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d4、5
‑
甲基四氢叶酸
‑
d4、5
‑
甲酰四氢叶酸
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d4、黄素腺嘌呤二核苷酸
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d5和维生素B3
‑
d4；所述的试剂盒包含如下试剂：(1)电解质浓缩液A：40～60％甲酸
‑
水溶液；(2)电解质浓缩液B：40～60％甲酸
‑
甲醇；(3)混合标准S0溶液：包含有2μmol/L叶酸、20μmol/L 5
‑
甲基四氢叶酸、4μmol/L 5
‑
甲酰四氢叶酸、40μmol/L黄素腺嘌呤二核苷酸和2000μmol/L维生素B3的甲醇水溶液；(4)内标SI溶液：包含有0.2μmol/L叶酸
‑
d4、2μmol/L 5
‑
甲基四氢叶酸
‑
d4、0.4μmol/L 5
‑
甲酰四氢叶酸
‑
d4、4μmol/L黄素腺嘌呤二核苷酸
‑
d5和40μmol/L维生素B3
‑
d4的甲醇水溶液；(5)保护剂：1％～3％VC溶液；(6)pH调节剂：1M～5M NaOH溶液；(7)裂解液：含0.3～1.0unit/ml谷氨酰水解酶的水溶液。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒，其特征在于，所述电解质浓缩液A为50％甲酸
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水溶液；所述电解质浓缩液B为50％甲酸
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甲醇；所述保护剂为2％VC溶液；所述pH调节剂为2M～3M NaOH溶液，优选为2M NaOH溶液；所述裂解液为含0.4～0.7unit/ml谷氨酰水解酶的水溶液，优选为含0.5unit/ml谷氨酰水解酶的水溶液。3.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒，其特征在于，所述混合标准S0溶液按照如下方法制备：称取各待测物标准品，包括叶酸、5
‑
甲基四氢叶酸、5
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甲酰四氢叶酸、黄素腺嘌呤二核苷酸和维生素B3，分别加入甲醇水溶液完全溶解，配制成浓度为1mmol/L叶酸、10mmol/L 5
‑
甲基四氢叶酸、1mmol/L 5
‑
甲酰四氢叶酸、1mmol/L黄素腺嘌呤二核苷酸和20mmol/L维生素B3的标准品储备液；上述各标准品储备液再以甲醇水溶液配制成包含有2μmol/L叶酸、20μmol/L 5
‑
甲基四氢叶酸、4μmol/L 5
‑
甲酰四氢叶酸、40μmol/L黄素腺嘌呤二核苷酸和2000μmol/L维生素B3的混合标准S0溶液；所述内标SI溶液按照如下方法制备：称取各同位素内标物，包括叶酸
‑
d4、5
‑
甲基四氢叶酸
‑
d4、5
‑
甲酰四氢叶酸
‑
d4、黄素腺嘌呤二核苷酸
‑
d5和维生素B3
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d4，分别加入甲醇水溶液完全溶解，配制成浓度为0.1mmol/L叶酸
‑
d4、1mmol/L 5
‑
甲基四氢叶酸
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d4、0.1mmol/L 5
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甲酰四氢叶酸
‑
d4、1mmol/L黄素腺嘌呤二核苷酸
‑
d5和1mmol/L维生素B3
‑
d4的同位素储备液；上述各同位素内标储备液再以甲醇水溶液配制成包含有0.2μmol/L叶酸
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d4、2μmol/L5
‑
甲基四氢叶酸
‑
d4、0.4μmol/L 5
‑
甲酰四氢叶酸
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d4、4μmol/L黄素腺嘌呤二核苷酸
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d5和40μmol/L维生素B3
‑
d4的同位素混合内标SI溶液。
4.根据权利要求3所述的高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒，其特征在于，在配制混合标准S0溶液和内标SI溶液时，所述甲醇水溶液为50～90％甲醇水溶液，优选为80％甲醇水溶液。5.根据权利要求4所述的高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含如下试剂：(1)电解质浓缩液A：50％甲酸
‑
水溶液；(2)电解质浓缩液B：50％甲酸
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甲醇；(3)混合标准S0溶液：称取各待测物标准品，包括叶酸、5
‑
甲基四氢叶酸、5
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甲酰四氢叶酸、黄素腺嘌呤二核苷酸和维生素B3，分别加入80％甲醇水溶液完全溶解，配制成浓度为1mmol/L叶酸、10mmol/L 5
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甲基四氢叶酸、1mmol/L 5
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甲酰四氢叶酸、1mmol/L黄素腺嘌呤二核苷酸和20mmol/L维生素B3的标准品储备液；上述各标准品储备液再以80％甲醇水溶液配制成包含有2μmol/L叶酸、20μmol/L 5
‑
甲基四氢叶酸、4μmol/L 5
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甲酰四氢叶酸、40μmol/L黄素腺嘌呤二核苷酸和2000μmol/L维生素B3的混合标准S0溶液；(4)内标SI溶液：称取各同位素内标物，包括叶酸
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d4、5
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甲基四氢叶酸
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d4、5
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甲酰四氢叶酸
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d4、黄素腺嘌呤二核苷酸
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d5和维生素B3
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d4，分别加入80％甲醇水溶液完全溶解，配制成浓度为0.1mmol/L叶酸
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d4、1mmol/L 5
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甲基四氢叶酸
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d4、0.1mmol/L 5
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甲酰四氢叶酸
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d4、1mmol/L黄素腺嘌呤二核苷酸
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d5和1mmol/L维生素B3
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d4的同位素储备液；上述各同位素内标储备液再以80％甲醇水溶液配制成包含有0.2μmol/L叶酸
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d4、2μmol/L 5
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甲基四氢叶酸
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d4、0.4μmol/L 5
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甲酰四氢叶酸
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d...

【专利技术属性】
技术研发人员：李美娟，成晓亮，盛蔚，吴启楠，张伟，
申请(专利权)人：南京品生医学检验实验室有限公司武汉品生医药科技有限公司福州品生医疗科技有限公司福建品生万福医学检验有限公司陕西品生致吉医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

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