用于高灵敏检测重金属镉的正负反馈全细胞生物传感器的构建方法与应用技术

本发明专利技术涉及用于高灵敏检测重金属镉的正负反馈全细胞生物传感器的构建方法与应用；将TetR负反馈模块与LuxR正反馈模块偶联，添加至基础传感器基因电路中，构建可高灵敏检测重金属镉的正负反馈全细胞生物传感器P

【技术实现步骤摘要】
用于高灵敏检测重金属镉的正负反馈全细胞生物传感器的构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及用于高灵敏检测重金属镉的正负反馈全细胞生物传感器的构建方法与应用；涉及一种基于正负反馈电路的全细胞生物传感器的构建方法，并利用该方法构建用于高灵敏检测镉离子的全细胞生物传感器，提供全细胞生物传感器在重金属污染检测方面的应用，属于分子生物学及基因工程菌改造领域。

技术介绍

[0002]随工业发展，镉(Cd)因其优良的性质而广泛应用于合金、电池、电镀等工业各领域，但其在开采、冶炼和生产环节都会对环境造成严重污染，危害很大。首先，镉很难在农田土壤中分解或从土壤中迁出，会导致土壤中其他元素缺乏，造成农作物生长不良并减产；其次，镉在动植物中会发生富集，即使少量摄入也会对肾、肝、肺等器官和骨骼、免疫系统造成损害，长期摄入会导致严重中毒，“痛痛病”就是慢性镉中毒的著名案例。因此，开发能够灵敏、快速、实时检测镉离子污染的检测方法很有必要。传统的电化学和光学检测方法灵敏度高，选择性强，但需要使用昂贵的仪器并由专业检测人员进行操作，很难实现实时、现场检测，在检测过程中还可能本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于高灵敏检测重金属镉的正负反馈全细胞生物传感器的构建方法，其特征是，包括如下步骤：(1)通过聚合酶链式反应分别扩增编码负反馈模块的启动子P
lteto1
和tetR基因、编码正反馈模块的P
luxI
启动子和luxR基因、编码传感模块的启动子P
cad
和cadR基因、编码报告基因的mcherry红色荧光蛋白基因，从iGEM数据库中获得的核糖体结合位点与终止子序列，利用重叠延伸PCR将各基因元件按照P
lteto1
‑
rbs
‑
cadR
‑
rbs
‑
tetR
‑
T
‑
P
cad
‑
rbs
‑
luxR
‑
T
‑
P
luxI
‑
rbs02
‑
mcherry
‑
rbs
‑
luxR
‑
T的电路顺序进行连接；(2)通过无缝克隆将酶切好的广宿主穿梭质粒pBBR1MCS
‑
2与传感器基因电路进行连接，构建重组质粒P
‑
LTCM，将其导入感受态细胞E.coli DH5α中，挑取在抗性平板上生长出的单菌落进行菌落PCR，筛选出转入构建质粒的菌株；(3)从导入构建质粒的E.coliDH5α中提取质粒，导入Pseudomonas putida KT2440中，通过菌落PCR筛选转入质粒的菌株，而...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾晓强，胡舒婷，张广豹，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：