一种抑制人类乳头瘤病毒感染的改造CPP多肽及其制备的纳米制剂和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抑制人类乳头瘤病毒感染的改造CPP多肽及其制备的纳米制剂和应用，属于生物药物技术领域。本发明专利技术提供了一种改造CPP多肽，在人类乳头瘤病毒(HPV)16的细胞穿膜肽基础上增加2个精氨酸和1个赖氨酸，不仅没有影响CPP多肽靶向干扰细胞内HPV运输必需的蛋白质的性能，还提高穿膜效率。本发明专利技术还提供了一种CPP多肽脂质体，维持改造CPP多肽的稳定性。此外，本发明专利技术还提供一种由多肽脂质体和酸性电解水制备的纳米制剂，不仅进一步提高产品在抑制人类乳头瘤病毒感染方面的性能，还能长效抑制多种细菌，具有较高的应用价值。具有较高的应用价值。具有较高的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制人类乳头瘤病毒感染的改造CPP多肽及其制备的纳米制剂和应用


[0001]本专利技术属于生物药物
，具体涉及一种抑制人类乳头瘤病毒感染的改造CPP多肽及其制备的纳米制剂和应用。

技术介绍

[0002]人类乳头瘤病毒(HPV)是一种球形DNA病毒，主要类型为HPV1、2、6、11、16、18、31、33及35型等。人体感染病毒后，可引起一系列疾病。在临床上表现为皮肤上出现寻常疣或者扁平疣，甚至引起多种恶性肿瘤，如妇科常见的宫颈癌。因此，现在人们对HPV的检测，预防和治疗越来越重视。
[0003]目前，预防HPV感染的有效手段是提前注射HPV疫苗，它主要通过合成病毒的衣壳蛋白L1，然后组装成病毒样颗粒(virus
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like
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particle,VlP)，注射人体后诱导产生中和抗体，表现出很好的预防HPV感染的效果。然而研究显示VIP作为亚单位蛋白疫苗刺激细胞免疫反应强度较弱，表现出有限的治疗效果，对预先存在的HPV感染或癌前病变治疗效果不显著(参见CN114134165A)。另外，由于全球范围内的HPV预防接种率不理想，HPV感染在未来几十年仍然是公共卫生问题。因此急需开发抑制或清除HPV持续感染的相关试剂或药物。
[0004]现有技术报道了HPV的L2蛋白是传入病毒正确运输到细胞核、病毒基因表达和DNA复制位点所必需的，主要机理是L2蛋白C末端附近的一段碱性氨基酸充当细胞穿透肽(CPP)，它将胞外蛋白质通过细胞膜转移到细胞质中。同时与CPP相邻有一个能与细胞蛋白复合物(逆转录酶)结合的RBS位点，当CPP引导的蛋白质进入细胞质后，胞内的逆转录酶与RBS位点结合，激活信号通路，将细胞蛋白和进入的病毒颗粒分类到逆转运通道中，以转运至高尔基体网络(TGN)前往细胞核中进行病毒基因的复制表达。可见现有技术公开了细胞穿透肽(CPP)在病毒进入过程中发挥逆转录酶介导的人乳头瘤病毒运输的作用。同时现有技术公开了为了有效控制HPV感染，提出了一种新型融合多肽疫苗，具体见细胞穿膜肽HIV
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1Tat49
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57，与CTL表位肽HPV16 E749
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57融合，与带负电荷的质粒形成复合物自组装形成纳米颗粒，具有抗原表位特异性和免疫原性，可诱导细胞免疫。可见现有技术中控制HPV感染的方式通过其他病毒细胞穿膜肽介导下进入细胞中发挥免疫原性从而诱导机体自身免疫反应。而对于细胞穿膜肽为靶点的抗HPV治疗方法并未有相关报道。
[0005]此外，在HPV感染治疗过程中，常用利用妇科清洗液对生殖道护理进行体外辅助治疗。目前，市场上销售的妇科洗液主要是针对细菌性阴道炎或者滴虫性阴道炎的洗液，如甲硝唑氯己定洗液、茯蒲洗液、红核洗液、妇炎洁洗液等。然而针对抑制HPV病毒的洗液较少，市场上销售的有瑞贝安抗HPV私处清洁洗液、领跃愈舒
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卡波姆妇科洗液、佩蔲抗HPV生物蛋白抑菌洗液。瑞贝安抗HPV私处清洁洗液的主要成分是从植物中萃取的多种中药成分。领跃愈舒
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卡波姆妇科洗液和佩蔲抗HPV生物蛋白抑菌洗液主要成分为生物蛋白、卡波姆、醋酸氯已定0.03％～0.25％。二者的有效成分均为醋酸氯已定，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有明显的抑制作用。说明书中提示是广谱的抗病毒洗液，对HPV的抑制效果没有明确说明。
[0006]综上所述，市场上销售的抑制HPV的洗液存在以下几个问题：(1)说明书中没有明确说明抑制HPV的有效成分及抑制效果。(2)洗液作用于广谱的抗病毒，抑制HPV的靶向性弱。(3)从植物中提取的中药洗液，原料质量参差不齐，成分复杂，导致产品批间差大，结果不稳定。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种改造CPP多肽，通过对CPP多肽的氨基酸序列组成的改造，提高该多肽的穿膜效率，同时所述改造CPP多肽通过竞争性结合HPV运输所必需的蛋白质，从而阻断HPV运输以及基因复制，最终抑制HPV的感染。
[0008]本专利技术的目的还在于提供一种抑制人类乳头瘤病毒感染的纳米制剂，包括磷脂双分子层包裹的改造CPP多肽和酸性电解水，不仅能有效抑制HPV基因在细胞核中扩增，而且还具有抑制多种细菌感染的作用。
[0009]本专利技术提供了一种改造CPP多肽，所述改造CPP多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0010]本专利技术提供了所述改造CPP多肽在制备抑制人类乳头瘤病毒感染的药物或抑制剂中的应用。
[0011]本专利技术提供了一种抑制人类乳头瘤病毒感染的多肽脂质体，包括脂质体和嵌入在所述脂质体内部的所述改造CPP多肽。
[0012]优选的，所述改造CPP多肽占所述脂质体质量的0.5％～1％。
[0013]优选的，所述脂质体包括卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰甘油、胆固醇和磷脂溶解液；
[0014]所述卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰甘油和胆固醇的质量比为2：5：2：1；
[0015]所述卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰甘油和胆固醇的总质量和磷脂溶解液的体积比为1g:10mL。
[0016]优选的，所述卵磷脂包括蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂或动物肝脏提取的卵磷脂；
[0017]所述磷脂酰甘油包括蛋黄磷脂酰甘油或大豆磷脂酰甘油。
[0018]本专利技术提供了一种抑制人类乳头瘤病毒感染的纳米制剂，包括所述多肽脂质体和酸性电解水。
[0019]优选的，所述多肽脂质体和酸性电解水的质量比为1：(10～15)。
[0020]优选的，所述酸性电解水的有效氯浓度为10～60mg/L，pH值为3.0～4.5，氧化还原电位值大于1000mV。
[0021]本专利技术提供了所述多肽脂质体在制备抑制人类乳头瘤病毒感染的产品中的应用。
[0022]本专利技术提供了一种改造CPP多肽，所述改造CPP多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本专利技术在传统的人类乳头瘤病毒CPP短肽的基础上增加2个精氨酸和1个赖氨酸，不仅没有影响CPP短肽靶向干扰细胞内HPV运输所必需的蛋白质的能力，阻断HPV运输到高尔基体，防止在细胞核中进行基因复制，从而抑制HPV对细胞的感染，而且还能提高多肽本身的正电荷，大大提高CPP多肽的穿膜效率，进一步提高竞争性结合HPV运输的相关蛋白，抑制HPV病毒复制，降低HPV感染效果。
[0023]本专利技术提供了一种抑制人类乳头瘤病毒感染的多肽脂质体，包括脂质体和嵌入在
所述脂质体内部的所述改造CPP多肽。本专利技术将改造CPP多肽嵌入在所述脂质体内部，形成微型囊泡，可以和细胞膜有效的融合，从而将改造CPP多肽送入细胞内，提高其透膜效率。
[0024]进一步的，所述脂质体中包含氢化大豆卵磷脂。本专利技术为了防止改造CPP多肽中半胱氨酸和精氨酸被酸性电解水中的次氯酸氧化，失去活性，在制备多肽脂质体时加入一定比例的氢化大豆卵磷脂，它具有抗氧化作用，从而保护CPP多肽。
[0025]本专利技术还提供了一种抑制人类本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改造CPP多肽，其特征在于，所述改造CPP多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.权利要求1所述改造CPP多肽在制备抑制人类乳头瘤病毒感染的药物或抑制剂中的应用。3.一种抑制人类乳头瘤病毒感染的多肽脂质体，其特征在于，包括脂质体和嵌入在所述脂质体内部的权利要求1所述改造CPP多肽。4.根据权利要求3所述多肽脂质体，其特征在于，所述改造CPP多肽占所述脂质体质量的0.5％～1％。5.根据权利要求3或4所述多肽脂质体，其特征在于，所述脂质体包括卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰甘油、胆固醇和磷脂溶解液；所述卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰甘油和胆固醇的质量比为2：5：2：1；所述卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰甘油和胆固醇的总质量和磷脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：渠志灿，张全爱，赵邑，杨欣，潘薇薇，梁欣欣，李建丽，郝花花，
申请(专利权)人：山西纳安生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：