【技术实现步骤摘要】
一种单细胞筛选鉴定人乳头瘤病毒特异性TCR的方法
[0001]本专利技术属于肿瘤免疫治疗领域，涉及TCR
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T细胞免疫治疗，具体而言，本专利技术涉及一种单细胞筛选鉴定人乳头瘤病毒特异性TCR的方法。
技术介绍
[0002]人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)属乳头瘤病毒科乳头瘤病毒属，是一组嗜上皮组织双链小分子DNA病毒的总称。HPV感染人类上皮组织，能引起人类皮肤和黏膜的增生性病变，根据危险程度的不同，除导致多种乳头状瘤或疣以外，还与多种肿瘤的发生发展密切相关，如宫颈癌(cervical cancer)、膀胱癌、甲状腺癌、大肠癌、乳腺癌和皮肤癌等。在诸多HPV相关肿瘤中，宫颈癌是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤，发病率居全球女性肿瘤第二位，被称为“危害健康女性的杀手”，占女性癌症患者总数的15％，对女性健康威胁极大。99％以上的宫颈癌患者的癌组织中可以检测到HPV存在，高危型HPV的持续感染是宫颈癌最主要的发病因素。据WHO最新数据显示，全球每年因宫颈癌而死亡的人数达27.3万，...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种单细胞筛选鉴定人乳头瘤病毒特异性TCR的方法，其特征在于，包括如下步骤：制备标记的MHC H
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Db限制性HPV多肽四聚体；将待筛选鉴定的人乳头瘤病毒TCR细胞用抗CD3、抗CD8和标记的MHC H
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Db限制性HPV多肽四聚体标记，通过流式细胞术筛选四聚体
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/CD8
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的TCR阳性单细胞；将筛选得到的四聚体
+
/CD8
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的TCR阳性单细胞用细胞裂解液裂解后，以TCRα链和TCRβ链的引物进行PCR扩增，扩增产物进行基因测序，确定HPV多肽特异性TCR基因序列。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HPV多肽为HPV
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16E6或HPV
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16E7。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标记的MHC H
‑2‑<...
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