一种角质酶变体及其制备方法和在塑料降解中的应用技术

本发明专利技术属于酶工程和塑料降解技术领域，具体涉及一种角质酶变体及其制备方法和在塑料降解中的应用。本发明专利技术以角质酶ICCG为出发酶利用生物信息学及蛋白质工程技术进行工程改造，获得一系列底物PET亲和力提高的突变体，经试验验证，所获得的角质酶变体对PET具有更高亲和力，同时对于PET的水解活性更高，只需要3.7小时或更短就可以水解90％的PET底物；同时超过99％的水解产物是对苯二甲酸和乙二醇单体，几乎没有不完全降解的BHET和MHET，水解更加彻底，从而更加有利于满足PET废弃物的解聚再利用的实际应用需求，因此具有良好的实际应用之价值。价值。价值。

【技术实现步骤摘要】
一种角质酶变体及其制备方法和在塑料降解中的应用


[0001]本专利技术属于酶工程和塑料降解
，具体涉及一种角质酶变体及其制备方法和在塑料降解中的应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)是由对苯二甲酸和乙二醇两种单体通过酯键聚合而成的聚酯型塑料，是最丰富的石油基合成聚合物之一，具有重量轻、绝缘性好、强度及透明度高等优良性能，已被广泛用于一次性饮料瓶、包装、服装和电气配件等领域，极大地方便了人们的生活。全球每年消耗超过3亿吨PET，消费后的PET仅少部分被回收，大部分被丢弃到环境中，造成了严重的环境污染和资源浪费。目前主要的处理方式为填埋和焚烧，容易造成资源浪费和二次污染。
[0004]近年来，使用酶法催化PET废弃物解聚为解决PET污染问题提供了一条绿色环保的途径。目前已经发现多种角质酶、脂肪酶、羧酸脂酶可以将非特异性底物PET水解为低聚物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种角质酶变体，其特征在于，所述角质酶变体选自下组中的任意一个或多个位点发生突变：T176A、T176N、H183W、A62D、T176Q、H183F、T176K、H183Y、S212E、N213Q、S65K、S65I、N213D、S65H、W69C、Q182F、D63E、S212A、I208Q、W69Y、S212R、N211Y、Q182D、Q182G、S206A、S212H、I208V、Q182W、D91S、Y60W、D91C、I208P、I208S、Q182T、Q182V、S206R、W69V、I208N、I208R；其中，氨基酸残基编号采用SEQ ID NO.1所示的编号。2.如权利要求1所述的角质酶变体，其特征在于，所述角质酶变体在SEQ ID NO.1所示的角质酶ICCG基础上进行突变，并且所述角质酶变体选自下组中的突变体：LCC
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A1：H183Y；LCC
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A2：H183Y/N213D；LCC
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A3：H183Y/N213D/S212A。3.如权利要求1
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2任一项所述的角质酶变体，其特征在于，所述角质酶变体在羧基端修饰有His标签，所述His标签氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1
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3任一项所述的角质酶变体。5.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求4所述所述的多核苷酸；所述重组表达载体通过所述多核苷酸有效地连接到表达载体上获得，所述表达载体为病毒载体、质粒、噬菌体、黏粒或人工染色体中的任意一种或多种；进一步的，所述表达载体为质粒，所述质粒为PET
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26b。6.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求5所述的重组表达载体或染色体整合有权利要求5所述多核苷酸或表达权利要求1
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3任一项所述的角质酶变体。7.一种制备权利要求1
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3任一项所述角质酶变体的方法，其特征在于，包括：培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：祁庆生，苏田源，崔志勇，郑义，李庆宾，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：