一种筛选强组成型启动子的方法技术

本发明专利技术公开了一种筛选强组成型启动子的方法，属于生物技术领域。本发明专利技术为解决目前大多数启动子文库的构建都是基于在现有启动子的基础上进行随机突变或是通过组学数据筛选的技术问题，基于对大肠杆菌MG1655，枯草芽孢杆菌168及谷氨酸棒杆菌ATCC13032的基因组进行随机打断，并将打断后的片段连接在报告基因绿色荧光蛋白GFP的上游，然后克隆至载体pUC19中，构建得到3个不同来源的随机文库。采用流式细胞仪技术(FACS)分选荧光强度明显增高的突变子，最终筛选得到一株来源于枯草芽孢杆菌168的突变子，其荧光强度比对照菌株高出19.7倍。最后通过序列截短鉴定出这段序列中最关键的60bp启动子序列。的60bp启动子序列。的60bp启动子序列。

【技术实现步骤摘要】
elements to unlock the microbial natural products in Streptomyces.Proc Natl Acad Sci U S A,112(39),12181
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6.)。综上，通过构建启动子文库能顺利从中筛选到合适基因表达的启动子，但目前大多数启动子文库的构建都是基于在现有启动子的基础上进行随机突变或是通过组学数据筛选。因此，急需设计一种新型的启动子文库的构建方法以丰富启动子的筛选方式。

技术实现思路

[0004]为解决目前大多数启动子文库的构建都是基于在现有启动子的基础上进行随机突变或是通过组学数据筛选的技术问题，本专利技术提供了利用新型启动子文库构建方法筛选强组成型启动子的方法，具体技术方案如下：
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种筛选强组成型启动子的方法，所述方法为将多种细菌的基因组随机打断，构建随机的启动子文库，然后利用流式细胞仪分选荧光强度高于对照菌株的突变子，复筛后选取荧光强度最高的一株突变子进行后续测序验证，最后对这个启动子进行截短鉴定，获得最核心的启动子序列。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种筛选强组成型启动子的方法，其特征在于，所述方法为将多种细菌的基因组随机打断，构建随机的启动子文库，然后利用流式细胞仪分选荧光强度高于对照菌株的突变子，复筛后选取荧光强度最高的一株突变子进行后续测序验证，最后对这个启动子进行截短鉴定，获得最核心的启动子序列。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细菌包括大肠杆菌MG1655，枯草芽孢杆菌168和谷氨酸棒杆菌ATCC13032。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因组随机打断采用的是超声破碎法和/或酶切法。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述随机的启动子文库的构建是将随机打断获得的基因组碎片连接在报告基因gfp的上游，并克隆至载体pUC19上，连接产物转化至大肠杆菌JM109中，过夜培养后将平板上长出的菌落全部冲洗下来并用甘油保存，形成启动子文库。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用流式细胞仪分选荧光强度高于对照菌株的突变子过程中，所用的对照菌株是E.coli/pUC19
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PBBa_J23118
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gfp。6.根据权利要求1所述的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶志明，唐蜜，潘学玮，徐美娟，杨套伟，张显，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：