一种鉴别诊断犬瘟热病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、波氏杆菌的引物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鉴别诊断犬瘟热病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、波氏杆菌的引物组合物及其应用，属于生物技术领域。包括以下引物：外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，环引物LF和LB。本发明专利技术可用于鉴别诊断引起犬呼吸道疾病的犬瘟热病毒病原基因、犬腺病毒病原基因、犬副流感病毒病原基因、支气管败血波氏杆菌病原基因。本发明专利技术提供的引物组合物检测引起犬呼吸道疾病的病原基因。具有灵敏度好、特异性高、用时短、稳定性高等特点。稳定性高等特点。稳定性高等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别诊断犬瘟热病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、波氏杆菌的引物组合物及其应用


[0001]本专利技术属于病毒检测
，具体涉及一种鉴别诊断犬瘟热病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、波氏杆菌的引物组合物及其应用。

技术介绍

[0002]犬呼吸道病原感染严重危害宠物健康与生活质量，是宠物疾病中发病率最高的症状之一，且常因多种呼吸道病原病毒混合感染而使病情加重。引起犬呼吸道疾病的病原主要包括犬瘟热病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、支气管败血波氏杆菌。
[0003]犬瘟热病毒(canine distempervirus，CDV)属于副粘病毒科，麻疹病毒属。病毒粒子多呈球形，多在核酸为RNA型。感染犬科的高度接触性、致死性传染病。其特征：双相热型、急性卡他性呼吸道炎、胃肠炎和脑炎。是感染犬的一种最古老的、临床意义重大的病毒。主要通过空气和飞沫水平传播。传染源：病犬的鼻汁、唾液、泪液，也见于血液、脑脊髓液、淋巴液、肝、脾、心包液、胸和腹水中，并能通过尿液长期排毒。传播途径：直接接触；空气飞沫；胎盘CDV感染病型复杂多样，临床上诊断很困难，易与上呼吸道感染、犬传染性肝炎、犬冠状病毒感染等相混淆，必须根据病毒分离鉴定确诊。
[0004]犬腺病毒(Canine adeno virus,CAV)属于腺病毒科,哺乳动物腺病毒属,双股DNA病毒。是哺乳动物腺病毒属中致病性最强的一种病毒。有两个血清型。Ⅰ型可引起犬传染性肝炎，Ⅱ型可引起犬传染性喉气管炎和肠炎。犬腺病毒Ⅱ型可引起犬的传染性喉气管炎及肺炎症状。临床特征表现持续性高热、咳嗽、浆液性至粘液性鼻漏、扁桃体炎、喉气管炎和肺炎。从临床发病情况统计，该病多见于4月龄以下的幼犬。在幼犬可以造成全窝或全群咳嗽，因此该病依临床特征常称为“犬窝咳”。犬腺病毒的感染潜伏期为5
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6天。持续性发热(体温在39.5℃左右。鼻部流浆液性鼻液，随呼吸向外喷水样鼻液。表现6
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7天阵发性干咳，后表现湿咳并有痰液，呼吸喘促，病状继续发展可引起坏死性肺炎。病犬可表现精神沉郁、不食。并有呕吐和腹泻症状出现。该病往往易和犬瘟热、犬副流感病毒及支气管败血波氏杆菌混合感染。混合感染的犬预后大多不良。
[0005]犬副流感病毒(Canine ParainfluenzaVirus,CPIV)CPIV在分类上属副粘病毒科，副粘病毒属。核酸型为单股RNA。是犬的主要的呼吸道传染病。临床表现发热、流涕和咳嗽。病理变化以卡他性鼻炎和支气管炎为特征。近年来研究认为，CPIV也可引起急性脑髓炎和脑内积水，临床表现后躯麻痹和运动失调等症状。CPIV可感染玩赏犬、试验犬和军、警犬，在军犬中常发生呼吸道病，在试验犬产生犬瘟热样症状。急性期病犬最是主要的传染来源。自然感染途径主要是呼吸道。
[0006]支气管败血波氏杆菌(Bordetellabronchiseptica,Bb)为革兰阴性细小球菌，具鞭毛而能运动，极好氧，病犬病初精神、食欲无明显变化，仅出现短而粗的干咳，随后咳嗽症状加剧，出现痉挛性干咳，呈气管炎症状，接着是干呕或作呕以图清除喉中的少量黏液，运动时咳嗽加重，并且晚上特别明显。咳嗽随着运动增加和气管、喉部诱咳或食物的刺激而加
剧。有些病犬表现为阵发性吸气性呼吸困难，触压喉头或气管时容易诱发咳嗽，体温升高至39～40℃之间，打开口腔检查扁桃腺和咽部有炎症反应；视诊呼吸频数增多；听诊呼吸音增强，肺区出现哕音，有的犬鼻腔有黏液性、脓性分泌物。
[0007]犬呼吸道传染病的临床表现非常相似，不易区别。目前细胞培养时分离和鉴定是目前的最好方法。但细胞培养耗时较长，对实验环境要求高，人工成本高。高通量LAMP微流控芯片检测病毒性腹泻病原效率更高，更便捷。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供一种鉴别诊断犬瘟热病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、波氏杆菌的引物组合物及其应用。具体通过以下技术方案实现：
[0009]所述用于检测犬瘟热病毒F基因的引物组合物，包括以下引物：
[0010]F3引物为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；
[0011]B3引物为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；
[0012]FIP引物为SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；
[0013]BIP引物为SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；
[0014]F3(SEQ ID No.1)：CAAGCTTTGACTCTAATGACC；
[0015]B3(SEQ ID No.2)：TCAAGGCTAGTTCTCAGAGA；
[0016]FIP(SEQ ID No.3):
[0017]TGCAAGTACCACTCCTGCAACCTTTACAGTCAATAGGGTCG；
[0018]BIP(SEQ ID No.4)：
[0019]CAGCTTTAGGAGTGGCCACAGATTGCTTGAGCATTGAGG。
[0020]所述的引物还包括将上述各F3、B3、FIP、BIP引物序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后具有与上述序列具有相同功能的DNA分子。
[0021]所述用于检测犬腺病毒p
‑
VIII基因的引物组合物，包括以下引物：
[0022]F3引物为SEQ ID No.5所示的核苷酸序列；
[0023]B3引物为SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；
[0024]FIP引物为SEQ ID No.7所示的核苷酸序列；
[0025]BIP引物为SEQ ID No.8所示的核苷酸序列；
[0026]LF引物为SEQ ID No.9所示的核苷酸序列；
[0027]LB引物为SEQ ID No.10所示的核苷酸序列；
[0028]F3(SEQ ID No.5)：CCAACTTGCGCAAATGCTTA；
[0029]B3(SEQ ID No.6)：GGAGGCGAGATATTCACAGC；
[0030]FIP(SEQ ID No.7):
[0031]TCGTGTCCGCTTCATGGCTTAATGTGGTCTCTCCCGACA；
[0032]BIP(SEQ ID No.8)：
[0033]CCATATGACGCCCCAAAACCCTTCCGGGGGATGATTCAGTG；
[0034]LF(SEQ ID No.9):GGTGTTGGTGAACGGGAAG；
[0035]LB(SEQ ID No.10):CCACTCAACCCCCTTTTTTTAATG。
[0036]所述的引物还包括将上述各F3、B3、FIP、BIP、LF、LB引物序列经过一个或几个核苷
酸的取代和/或缺失和/或添加后具有与上述序列具有相同功能的DNA分子。
[0037]所述用于检测犬副流感病毒NP基因的引物组合物，包括以下引物：
[0038]F3引物为SEQ ID No.11所示的核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测引起犬呼吸道疾病的病原基因的引物组合物，其特征在于，所述的引物组合物用于检测犬瘟热病毒F基因、犬腺病毒p
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VIII基因、犬副流感病毒NP基因、支气管败血波氏杆菌FimN基因；所述用于检测犬瘟热病毒F基因的引物组合物，包括以下引物：F3引物为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；B3引物为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；FIP引物为SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；BIP引物为SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；所述用于检测犬腺病毒p
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VIII基因的引物组合物，包括以下引物：F3引物为SEQ ID No.5所示的核苷酸序列；B3引物为SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；FIP引物为SEQ ID No.7所示的核苷酸序列；BIP引物为SEQ ID No.8所示的核苷酸序列；LF引物为SEQ ID No.9所示的核苷酸序列；LB引物为SEQ ID No.10所示的核苷酸序列；所述用于检测犬副流感病毒NP基因的引物组合物，包括以下引物：F3引物为SEQ ID No.11所示的核苷酸序列；B3引物为SEQ ID No.12所示的核苷酸序列；FIP引物为SEQ ID No.13所示的核苷酸序列；BIP引物为SEQ ID No.14所示的核苷酸序列；所述用于检测犬支气管败血波氏杆菌FimN基因的引物组合物，包括以下引物：F3引物为SEQ ID No.15所示的核苷酸序列；B3引物为SEQ ID No.16所示的核苷酸序列；FIP引物为SEQ ID No.17所示的核苷酸序列；BIP引物为SEQ ID No.18所示的核苷酸序列；LF引物为SEQ ID No.19所示的核苷酸序列；LB引物为SEQ ID No.20所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的一种用于检测引起犬呼吸道疾病的病原基因的引物组合物，其特征在于，所述的组合...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘凤华，于晓红，
申请(专利权)人：北京芯之悦生物技术中心有限合伙，
类型：发明
国别省市：