一种蓝光氧化损伤RPE细胞的实验装置制造方法及图纸

本实用新型专利技术公开了一种蓝光氧化损伤RPE细胞的实验装置，包括细胞培养箱和ROS监测模块；细胞培养箱内设置有若干个蓝色发光二极管；ROS监测模块用于监测所述细胞培养箱内ROS的水平变化情况；PRGF内含有VEGF和PEDF，PRGF监测模块用于监测细胞培养箱内VEGF和PEDF的变化情况；在蓝光的诱导刺激下，不受控制的氧化刺激作用会产生大量的活性氧(ROS)，间接测定蓝光处理后ARPE

【技术实现步骤摘要】
一种蓝光氧化损伤RPE细胞的实验装置


[0001]本技术涉及蓝光氧化损伤RPE细胞，尤其涉及一种蓝光氧化损伤RPE细胞的实验装置。

技术介绍

[0002]蓝光是可见光谱中对视网膜细胞有害的部分，研究表明这种短波长光被黄素和线粒体细胞色素组分吸收，导致线粒体膜去极化、ATP合成减少和活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)产生增加，进而损害视网膜色素上皮细胞(Retinalpigmentepithelium，RPE)的功能，导致视网膜相关眼部疾病的发生，如年龄性黄斑病变(Age
‑
relatedmaculardegeneration，AMD)。

技术实现思路

[0003]本技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种蓝光氧化损伤RPE细胞的实验装置。
[0004]为了实现上述目的，本技术采用了如下技术方案：
[0005]一种蓝光氧化损伤RPE细胞的实验装置，包括细胞培养箱和ROS监测模块；所述细胞培养箱内设置有若干个蓝色发光二极管；所述ROS监测模块用于监测所述细胞培养箱内ROS的水平变化情况；所述细胞培养箱内设置有用于活力测定的96孔平板和用于ROS合成测定的96孔暗底平板；所述实验装置还包括若干个培养皿，每一所述培养皿内均放置有不同培养基。
[0006]优选的，所述蓝色发光二极管为470nm，光强度为470lux。
[0007]与现有技术相比，本技术的有益效果是:
[0008]本技术设计一种蓝光氧化损伤RPE细胞的实验装置，在蓝光的诱导刺激下，不受控制的氧化刺激作用会产生大量的活性氧(ROS)，间接测定蓝光处理后ARPE
‑
19的ROS生成数量，从而探究蓝光诱导APRE
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19细胞氧化损伤机制。
附图说明
[0009]图1为本技术提出的结构示意图。
[0010]图例说明：
[0011]1、细胞培养箱，2、ROS监测模块，3、蓝色发光二极管。
具体实施方式
[0012]下面将结合本技术实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。
[0013]在本技术的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本技术的限制；术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性；此外，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本技术中的具体含义。
[0014]参照图1所示，一种蓝光氧化损伤RPE细胞的实验装置，包括细胞培养箱1和ROS监测模块2；细胞培养箱1内设置有若干个蓝色发光二极管3；ROS监测模块2用于监测细胞培养箱1内ROS的水平变化情况；细胞培养箱1内设置有用于活力测定的96孔平板和用于ROS合成测定的96孔暗底平板；实验装置还包括若干个培养皿，每一培养皿内均放置有不同培养基。
[0015]其中，蓝色发光二极管3为470nm，光强度为470lux；培养基包括Dulbecco改良Eagle培养基和DMEM/F12+1％FBS的培养基；Dulbecco改良Eagle培养基含中有10％胎牛血清(FBS)和抗生素。
[0016]本技术的工作原理：将人视网膜色素上皮细胞系(ARPE
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19)在添加了10％胎牛血清(FBS)和抗生素的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)中，于37℃5％CO2的潮湿空气环境下培养；达到汇合后，使用不含动物痕迹的商业酶分离细胞，然后对其用台盼蓝染色法染色，并用排除法检测细胞活力，培养得到的第23
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27代细胞用于实验；将ARPE
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19细胞接种到用于活力测定的96孔平板，用于ROS合成测定的96孔的暗底平板；并在其常规培养基中以25000个细胞/cm2的密度接种24小时，以使细胞沉淀；然后，将培养基更换为DMEM/F12+1％FBS的培养基，并将平板置于蓝色发光二极管3下由其作用24小时，以诱导细胞的初始损伤；然后，取出培养基，用(a)ARPE
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19细胞常规培养基(含10％FBS，称为对照组)，或(b)DMEM/F12处理细胞+6名捐赠者中每人获得20％的PRGF进行处理，保持蓝光曝光48小时；ROS监测模块2用于监测细胞培养箱1内ROS的水平变化情况；PRGF监测模块3用于监测细胞培养箱1内VEGF和PEDF的变化情况；监测到蓝光损伤作用到一定权值时，将培养皿从细胞培养箱1中取出，进行PRGF治疗。
[0017]ROS监测模块工作原理：蓝光照射24和48小时后，用4％多聚甲醛固定ARPE
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19细胞，用来自6个供体的对照或PRGF处理，然后用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤。在PBS中用0.1％TritonX
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100渗透细胞，用10％FBS封闭细胞。然后，将ARPE
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19细胞暴露于抗血红素加氧酶1(抗HO
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1)；用PBS冲洗后，将细胞与山羊抗兔抗体孵育细胞AlexaFluor488(分子探针)在室温下孵育1小时。用PBS洗涤孔，并加入Hoechst33342(分子探针)对细胞核进行复染。在荧光显微镜(LeicaDMIRB)下观察细胞，并采集每个孔的图像。实验进行三次。使用ImageJ软件处理图像，计数细胞数量并鉴定HO
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1阳性细胞。将获得的数据表示为每个孔中细胞核数量的平均SE和HO
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1阳性细胞相对于RPE细胞总数的百分比。
[0018]以上，仅为本技术较佳的具体实施方式，但本技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本技术揭露的技术范围内，根据本技术的技术方案及其技术构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本技术的保护范围之内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蓝光氧化损伤RPE细胞的实验装置，其特征在于，包括细胞培养箱和ROS监测模块；所述细胞培养箱内设置有若干个蓝色发光二极管；所述ROS监测模块用于监测所述细胞培养箱内ROS的水平变化情况；所述细胞培养箱内设置有用于活力测定的96孔平板和...

【专利技术属性】
技术研发人员：方思嘉，戴文涛，温尔雅，梁延，黎建浩，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：新型
国别省市：