【技术实现步骤摘要】
基于直接进样高分辨质谱的高通量检测代谢物方法
[0001]涉及小分子代谢物的检测及高分辨质谱领域，具体地，涉及基于直接进样高分辨质谱的高通量检测代谢物新方法。
技术介绍
[0002]代谢组学是以生物体中分子量小于1500的小分子代谢物为研究对象，可运用多种分析手段如质谱(Mass spectrometry,MS)、核磁共振(Nuclear magnetic resonance，NMR)、色谱
‑
质谱联用等从整体水平上研究胞内代谢物组成及其与生理、病理相关的变化规律。考虑到个体表型之间的实质性差异，大规模代谢组学研究越来越普遍，特别是在分子流行病学、精准医学以及代谢组全基因组关联研究等领域，已成为重要的支撑技术。对理解复杂疾病(病理)生理机制以及疾病的诊断、预防和治疗等有重要的作用。而发展高通量代谢组学分析方法对大规模代谢组学至关重要，已成为基于大规模样本代谢组学研究的首要任务。
[0003]随着质谱技术的发展，基于质谱的分析技术逐渐成为代谢组学研究不可或缺的工具，相对于NMR，质谱技术检测灵敏度更高...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.基于直接进样高分辨质谱的高通量检测代谢物方法，其特征在于：1)将10个以上待检测血清样本的混合样本，利用直接进样傅里叶变换离子回旋共振超高分辨质谱(DI
‑
FTICR MS)进行检测来构建血清代谢物数据库，包括代谢物的准确质核比以及对应的分子式；2)将10个以上待检测血清样本分别利用直接进样纳升喷雾电离高分辨质谱(DI
‑
nESIMS)的非靶向方法检测其代谢物的MS1信息；通过上述血清代谢物数据库搜索获得对应的分子式，最终实现代谢物的高通量分析。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：根据步骤1)数据库中分子式个数按质核比进行分段，每段中包含分子式个数在100
‑
500之间，步骤2)中分段采集代谢物MS1信息。3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于：1)采用固相微萃取(SPE)对混合血清样本进行前处理，采用甲醇沉淀蛋白对待检测血清样本进行前处理，提取代谢物；2)采用DI
‑
FTICR MS结合分段采集方式，对SPE处理后的混合血清样本进行分析，构建血清代谢物数据库；3)建立基于DI
‑
nESI Orbitrap MS的高通量代谢组分析方法：根据上述数据库中分子式在不同质核比范围内数量分布，建立分段采集代谢物MS1的检测方法，用于甲醇沉淀蛋白方法处理后待检测血清代谢组的高通量分析；并利用MS1检索上述自建分子式数据库用于分子式注释(质量匹配窗口
±
5ppm)。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤1)中利用SPE处理混合血清样本的具体步骤如下，(1)样品的酸化：取50
‑
60uL混合血清样本，加入180
‑
220uL乙腈，涡旋1
‑
2min后，在1300
‑
14000rpm/min条件下离心10
‑
15min，然后取上清200
‑
220uL冷冻干燥，利用80
‑
120uL水和10
‑
15uL体积浓度为25％的甲酸(V
甲酸
/V
水
：1/3)复溶并涡旋1
‑
2min，得到酸化样品；(2)SPE C18移液枪头活化：依次用80
‑
120uL甲醇、80
‑
120uL甲酸水溶液(V
甲酸
/V
水
：1/839)反复吸取排出冲洗SPE C18 tips 10
‑
20次；(3)上样：利用活化后的C18 tips反复吸取排出冲洗酸化样品10
‑
20次，待分析代谢物吸附于SPE小柱后，为了排除SPE吸附的干扰物质，利用80
‑
120uL甲酸水溶液(V
甲酸
/V
水
：1/839)吸取排出冲洗1
‑
3次SPE小柱，最后依次用80
‑
120uL体积浓度为50％甲醇/水(V
甲醇
/V
水
：1/1)吸取排出冲洗SPE小柱10
【专利技术属性】
技术研发人员：许国旺，孙晓珊，夏悦怡，张雨晴，赵欣捷，路鑫，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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