一种糖蛋白N-连接糖类型的鉴定和验证方法技术

本发明专利技术公开了一种糖蛋白N

【技术实现步骤摘要】
一种糖蛋白N
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连接糖类型的鉴定和验证方法


[0001]本专利技术涉及一种糖蛋白N
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连接糖类型的鉴定和验证方法。

技术介绍

[0002]糖基化是蛋白质最常见的翻译后修饰之一，包括N
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连接和O
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连接糖基化修饰。已知N
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连接糖链广泛存在于各种生物中，具有重要的生物学意义，其主要修饰在氨基酸保守序列上，即N
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X
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S/T(其中X为除了脯氨酸之外的任意氨基酸)。N
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连接糖链具有相似的核心结构，根据核心结构之外分支结构的不同将N
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连接糖链分成三种不同的类型：高甘露糖型(High mannose)、复杂型(Complex)和杂合型(Hybrid)。高甘露糖指核心结构之外，仅包含甘露糖；复杂型糖指在核心结构之外的分支结构都以N
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乙酰葡糖胺(HexNAc)开始延伸；杂合型糖指核心结构之外的分支分别以N
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乙酰葡糖胺和甘露糖开始延伸。高甘露糖修饰的糖蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种糖蛋白N
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连接糖类型的鉴定和验证方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、从待解析生物样本中制备完整N
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糖肽样本；S2、完整N
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糖肽样本经电喷雾电离后得到前体离子，将前体离子送入质谱仪，得到包含前体离子同位素轮廓指纹的实验一级质谱图；S3、将前体离子的同位素轮廓指纹与对应的靶向正向理论数据库进行匹配，筛选出符合匹配条件的具有相同分子组成的单糖组成；S4、将前体离子送入离子阱中进行气相解离得到碎片离子，将碎片离子送入质谱仪，得到包含碎片离子同位素轮廓指纹的二级质谱图；S5、对相同单糖组成不同序列结构的N
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连接糖的实验和理论碎片离子的分子组成指纹进行逐一同位素轮廓指纹比对；S6、自分子组成指纹相同但类型不同的N
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连接糖中靶向地筛选和验证各自的特征碎片离子，即高甘露糖型和杂合型N
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连接糖包含GlcNAc2Man4序列结构诊断碎片离子，复杂型N
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连接糖不包含该特定的碎片离子；S7、对经过序列结构特征诊断碎片离子筛选的N
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连接糖的二级质谱的匹配进行随机匹配概率打分，最后将符合预先设定的完整N
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糖肽谱图匹配条件的归结为靶向GPSMs；S8、在诱饵库中按照S3
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S7的步骤，获得诱饵GPSMs；S9、将靶向GPSMs和诱饵GPSMs组合，并按P score从小到大排序，选取一个阈值P score，使得假阳性不大于1％，对阈值P score以下的靶向GPSMs去重，获得完整N
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糖肽IDs。2.根据权利要求1所述的一种糖蛋白N
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连接糖类型的鉴...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄才岭，
申请(专利权)人：汉诺生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：