一种用于肠癌诊断的粪便外泌体蛋白的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于肠癌诊断的粪便外泌体蛋白的标志物及其应用，所述标志物包括外泌体蛋白CD147和A33。该标志物组能够准确、高效、方便用于结直肠癌的诊断和分级中。方便用于结直肠癌的诊断和分级中。

【技术实现步骤摘要】
一种用于肠癌诊断的粪便外泌体蛋白的标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物标志物领域，特别涉及的是一种用于肠癌诊断的粪便外泌体蛋白的标志物及其应用。

技术介绍

[0002]根据我国国家癌症中心中国结直肠癌筛查与早诊早治指南制定专家组在2020年发布的《中国结直肠癌筛查与早诊早治指南》，目前结直肠癌筛查和早期诊断方法主要有以下5种：(1)结肠镜；(2)粪便隐血试验(FIT)；(3)乙状结肠镜；(4)结肠CT成像技术；(5)多靶点粪便FIT
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DNA检测。
[0003]其中，结肠镜检查是整个结直肠癌筛查流程的核心环节，结肠镜下活检或切除标本的病理检查是结直肠癌确诊的金标准。结肠镜可直接观察到结直肠腔内壁，是发现肠道肿瘤最敏感的方法。然而，结肠镜检查前需要进行严格的肠道清洁准备，且检查具有较高的侵入性，受检者需要承受巨大痛苦，因而人群依从性较低。考虑到我国人口众多、结肠镜资源匮乏且分布不均，结肠镜筛查可作为个体化筛查的重要手段予以宣传推广，但不适用于大规模人群普查。
[0004]FIT利用血红蛋白抗原抗体反应的原理进行检测，判断肠道是否出血，作为结直肠癌的早期征象之一，是目前应用最广泛的结直肠癌筛查技术。但FIT对早期结直肠癌敏感性较低，且容易出现假阳性(其他肠道出血性疾病如溃疡性结肠炎、克隆氏病、缺血性肠炎、痔瘘裂等也会引起FIT阳性)。
[0005]乙状结肠镜与结肠镜类似，主要是对降结肠、乙状结肠及直肠进行肠镜检查，但由于乙状结肠镜自身的局限性，其对近端结肠肿瘤的发病率无明显降低作用。根据统计，中国患者中38％的结肠腺瘤和42％的结直肠癌位于近端结肠，提示乙状结肠镜检查会遗漏大量结肠病变。因此目前不推荐使用乙状结肠镜进行结直肠癌筛查。结肠CT成像又称CT模拟全结肠镜，是指在肠道清洁后，通过腹部高精度CT检查模拟成像，获得结直肠的三维图像从而诊断肠道肿瘤的方法。该方法需肠道准备、操作相对复杂、检查费用昂贵，同时存在假阳性、放射线危害、人群接受度低等诸多问题，目前暂不建议应用于人群筛查，仅适用于部分无法完成全结肠镜检查的病例。
[0006]多靶点粪便FIT
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DNA检测是利用DNA技术检测粪便中从肠道肿瘤脱落的癌细胞DNA异常甲基化和基因突变等，并与FIT相结合，提高了结直肠癌进展期腺癌的筛检敏感性和特异性，但对早期结直肠癌的敏感性依旧不理想，且成本较高。因此，亟需发展更加有效、简单、便捷的结直肠癌筛查方法。
[0007]外泌体携带源自母细胞的蛋白质、脂质、核酸以及其他生物活性分子，作为细胞间通讯的介质，参与细胞增殖、细胞分化、血管生成、免疫调节、肿瘤侵袭等多种生理或病理过程。不同的细胞(或相同的细胞在不同的生理病理条件下)所分泌的外泌体具有特异的分子生物学信息。因此，筛选肿瘤细胞分泌的外泌体标志物已成为癌症研究最重要的方向之一，对癌症早期诊断、分子分型、疗效评价和预后评估具有重要的临床意义。研究表明，miRNA的
失调与结直肠癌的发生发展密切相关，可能涉及结肠癌变的各个环节，在血液中分离出的miRNA可以作为CRC早期诊断和预后评估的潜在生物标志物。如CN109439749B公开了用于结直肠癌诊断的外泌体miRNA标志物及诊断试剂盒，所述miRNA标志物为let
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7b
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3p、miR
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139
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3p和miR
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145
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3p。CN114672560A公开了通过外泌体miRNA标志物鉴定结直肠癌状态的检测试剂盒和方法，检测来自所述受试者的血清或血浆中miRNA生物标志物水平的检测试剂，所述miRNA生物标志物选自hsa
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miR
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320a
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3p、hsa
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miR
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19a
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3p、hsa
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miR
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3p、hsa
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miR
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5p、hsa
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miR
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3p、hsa
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miR
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5p、hsa
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5p和hsa
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miR
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33b
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3p及其任意组合。但利用外周血液miRNA进行结直肠癌筛查的检测特异性不高，并不能准确地区分结直肠癌和其它癌症。因此，如何更准确筛查结直肠癌仍亟待解决。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的正是在于克服现有技术的不足，提供了一种特异性强、准确性高、稳定性好的肠癌诊断生物标志物以及试剂盒。
[0009]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0010]本专利技术提供一种用于肠癌诊断、分级和/或预后的标志物，所述标志物包括外泌体蛋白CD147和/或A33。优选为用于肠癌诊断的粪便外泌体蛋白的标志物。所述肠癌为大肠癌，优选所述肠癌为结直肠癌。所述外泌体蛋白CD147和/或A33为外泌体膜蛋白。优选为外泌体蛋白CD147和A33的标志组，或CEA以及外泌体蛋白CD147和A33的标志组。
[0011]所述外泌体为粪便外泌体，不源自外周血、血浆、血清等外泌体。
[0012]同时本专利技术的所述标志物还可以进一步包括CEA(癌胚抗原)。
[0013]本专利技术的标志物优选为外泌体标志组。
[0014]本专利技术还提供上述的标志物在制备肠癌诊断、分级和/或预后的检测试剂或试剂盒中的应用。
[0015]本专利技术还进一步提供用于检测上述的标志物的检测试剂或试剂盒。
[0016]该检测试剂或试剂盒，优选包括外泌体提取试剂、以及外泌体蛋白CD147和/或A33的检测试剂。
[0017]本专利技术还提供一种用于肠癌诊断、分级和/或预后的系统，所述系统包括患者外泌体标志物信息获取模块和分析评价模块，其中：所述患者外泌体信息获取模块，用于执行获取所述标志物的检测信息的步骤；所述评价模块，用于执行根据所述标志物的检测信息对所述患者进行诊断、分级和/或预后判断的步骤。
[0018]本专利技术利用蛋白组学、生物信息学、转录组学等手段，结合临床实践获得了用于结直肠癌筛查的粪便外泌体标志物。
[0019]在具体实施例中，本专利技术的外泌体通过包括超速离心法、密度梯度离心法、聚合物沉淀法、超滤法、体积排阻色谱、免疫亲和法中的一种或多种提取分离得到。
[0020]本专利技术优选高速离心法提取肠癌患者粪便样本的外泌体，用PBS缓冲液充分溶解后在2
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6℃条件下反复高速离心4
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8次制得。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于肠癌诊断、分级和/或预后的标志物，其特征在于，所述标志物包括外泌体蛋白CD147和/或A33，所述外泌体为粪便外泌体。2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述肠癌为大肠癌。3.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述肠癌为结直肠癌。4.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物还包括CEA。5.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物为外泌体蛋白CD147和A33的外泌体标志组。6.根据权利要求1
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5任意一项所述的标志物在制备肠癌诊断、分级和/或预后的检测试剂或试剂盒中的应用。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘定斌，张兆伟，刘雪卉，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：