IDH1巴豆酰化修饰异常在制备多囊卵巢综合征诊断产品中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种IDH1巴豆酰化修饰异常在制备多囊卵巢综合征诊断产品中的应用，涉及生物技术领域。发明专利技术人研究发现，多囊卵巢综合小鼠模型中IDH1赖氨酸巴豆酰化修饰存在异常，据此，根据IDH1巴豆酰化修饰情况，能够实现多囊卵巢综合征的诊断。囊卵巢综合征的诊断。囊卵巢综合征的诊断。

【技术实现步骤摘要】
IDH1巴豆酰化修饰异常在制备多囊卵巢综合征诊断产品中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种IDH1巴豆酰化修饰异常在制备多囊卵巢综合征诊断产品中的应用。

技术介绍

[0002]多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期女性最常见的以生殖障碍、代谢紊乱以及心理问题为特征的生殖内分泌代谢性疾病，发病率约5％～10％，临床表现多样，典型临床表现包括月经失调(月经稀发、闭经、功能失调性子宫出血)、高雄激素相关临床表现(多毛、痤疮、脱发)、胰岛素抵抗相关表现(肥胖)、卵巢多囊样改变、排卵异常等。近年来，随着生活水平提高、饮食结构改变、缺乏锻炼等因素，越来越多的年轻妇女罹患多囊卵巢综合症，由PCOS引发的不孕受到越来越多的关注。但是，由于PCOS发病机制不清、病因不明，目前临床工作停留在只有出现明确症状后才可进行诊疗，尚没有针对PCOS早期诊断的有效生物标志物。因此，如何提供一种可有效早期预测PCOS的生物标志物成为本领域亟需解决的技术难题。
[0003]近年来，随着高效液相色谱串联质谱技术的革新，蛋白质翻译后修饰(PTMs)作为调控表观遗传学事件的重要机制之一，受到了越来越多的关注。其中，赖氨酸巴豆酰化(Lysine Crotonylation,Kcr)修饰作为近两年跃入研究者视野的最新修饰类型，被证实与多种疾病息息相关。但是，目前关于赖氨酸巴豆酰化在PCOS方面相关研究还是空白。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。
专利技术内容
[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种IDH1巴豆酰化修饰异常在制备多囊卵巢综合征诊断产品中的应用，以解决上述问题中的至少一种。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供一种用于诊断多囊卵巢综合征的产品。
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种IDH1巴豆酰化修饰异常在制备多囊卵巢综合征诊断产品中的应用。
[0008]作为进一步技术方案，所述IDH1巴豆酰化修饰异常为IDH1赖氨酸位点上的巴豆酰化修饰异常；
[0009]作为进一步技术方案，所述IDH1赖氨酸位点包括K72、K115或K159中的至少一种。
[0010]作为进一步技术方案，所述IDH1赖氨酸位点为K72、K115和K159。
[0011]作为进一步技术方案，所述IDH1巴豆酰化修饰异常为IDH1巴豆酰化修饰下调。
[0012]第二方面，本专利技术提供了一种用于诊断多囊卵巢综合征的产品，所述产品用于检测IDH1的巴豆酰化修饰。
[0013]作为进一步技术方案，所述产品用于检测IDH1赖氨酸位点上的巴豆酰化修饰。
[0014]作为进一步技术方案，所述IDH1赖氨酸位点包括K72、K115或K159中的至少一种。
[0015]作为进一步技术方案，所述IDH1赖氨酸位点为K72、K115和K159。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0017]专利技术人研究发现，多囊卵巢综合小鼠模型中IDH1赖氨酸巴豆酰化修饰存在异常，据此，根据IDH1巴豆酰化修饰情况，能够实现多囊卵巢综合征的诊断。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1为本专利技术实施例提供的PCOS模型成功构建结果图；
[0020]图2为本专利技术实施例提供的PCOS组和对照组卵巢组织WB检测结果；
[0021]图3为本专利技术实施例提供的卵巢组织蛋白组学研究的具体流程示意图；
[0022]图4为本专利技术实施例提供的生物信息学分析结果；
[0023]图5为本专利技术实例提供的IDH1蛋白K72、K115、K159三个位点巴豆酰化水平差异分布图；
[0024]图6为本专利技术实施例提供的pcDNA3.0载体示意图；
[0025]图7为本专利技术实施例提供的IDH1 K72、K115、K159三个特异位点显著影响CHO细胞IDH酶活性，进而影响细胞功能结果图；
[0026]图8为本专利技术实施例提供的IDH1 K72、K115、K159三个特异位点显著影响CHO细胞α
‑
KG浓度，进而影响细胞功能结果图；
[0027]图9为本专利技术实施例提供不同组克隆形成实验结果；
[0028]图10为PCOS组女性和对照组女性全血总蛋白巴豆酰化水平WB检测结果；
[0029]图11为ROC曲线。
具体实施方式
[0030]下面将结合实施方式和实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0031]第一方面，本专利技术提供了一种IDH1巴豆酰化修饰异常在制备多囊卵巢综合征诊断产品中的应用。
[0032]其中，IDH1巴豆酰化修饰异常为IDH1赖氨酸位点上的巴豆酰化修饰异常；IDH1赖氨酸位点包括K72、K115或K159中的至少一种。
[0033]专利技术人研究发现，多囊卵巢综合小鼠模型中IDH1赖氨酸上K72、K115和K159位点的巴豆酰化修饰存在异常，据此，根据IDH1巴豆酰化修饰情况，能够实现多囊卵巢综合征的诊断。
blot实验。使用SDS
‑
PAGE聚丙烯酰胺凝胶，将胶放入电泳槽，加入1
×
电泳缓冲液，上样后进行电泳：恒压80V，电泳时间根据目标蛋白的大小及marker的位置确定；随后，使用PVDF膜进行转模，恒流300mA 1个半小时；转膜后，使用1
×
TBST室温洗膜10分钟，5％脱脂牛奶封闭液室温孵育1小时；使用1
×
TBST室温洗膜10分钟，加入5ml一抗(巴豆酰化抗体)稀释缓冲液4℃平缓摇动过夜孵育。第二天拿出膜，1
×
TBST洗膜3次，每次5分钟，加入二抗(1：5000稀释)，室温平缓摇动1h后，1
×
TBST洗膜3次，每次5分钟。加入显影液显影，根据条带的亮度来调整曝光时间。
[0052]图2是对照组与PCOS组卵巢组织巴豆酰化WB检测结果，编号1,2,3为对照组小鼠卵巢组织巴豆酰化水平结果，4,5,6为PCOS卵巢组织巴豆酰化水平结果，可发现，PCOS小鼠卵巢组织巴豆酰化明显降低。
[0053]1.3卵巢组织质谱检测结果及生信分析
[0054]第一，留取小鼠卵巢组织，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.IDH1巴豆酰化修饰异常在制备多囊卵巢综合征诊断产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述IDH1巴豆酰化修饰异常为IDH1赖氨酸位点上的巴豆酰化修饰异常。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述IDH1赖氨酸位点包括K72、K115或K159中的至少一种。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述IDH1赖氨酸位点为K72、K115和K159。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述IDH1巴豆...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书七页序列表电子公布附图八页，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：