一种用于预测成人微小病变性肾病的尿液PCR试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及医疗诊断技术领域，具体提供一种用于预测成人微小病变性肾病的尿液PCR试剂盒。本发明专利技术提供的检测成人微小病变性肾病的试剂盒中含有扩增miR

【技术实现步骤摘要】
一种用于预测成人微小病变性肾病的尿液PCR试剂盒


[0001]本专利技术涉及疾病检测
，尤其涉及一种用于预测成人微小病变性肾病的尿液PCR试剂盒。

技术介绍

[0002]微小病变性肾病是儿童中最常见的肾病综合征病因，也是成人中第三大原发性肾小球肾炎类型。微小病变性肾病约占10岁以内儿童肾病综合征的70％
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90％及成人肾病综合征的10％
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30％。微小病变性肾病患者通常起病较急，表现为典型的肾病综合征，水肿较明显，可伴有重度的胸水和腹水。
[0003]由于微小病变性肾病患者出现明显的低蛋白血症，患者往往容易合并感染、血栓、栓塞、电解质紊乱和急性肾损伤等严重并发症。在没有糖皮质激素的年代，微小病变性肾病患者死亡率可高达20％，且死亡原因多为继发感染。微小病变性肾病患者对糖皮质激素治疗效果较好，约90％患者经糖皮质激素治疗可发生缓解。因此，对于部分患者，特别是儿童患者，对于足量糖皮质激素治疗肾病综合征可发生完全缓解而做出推断性诊断，而无需肾活检穿刺术。
[0004]但推断性诊断缺点十分明显，一是无法保证准确性，二是对于膜性肾病等单用糖皮质激素无效的肾小球肾炎，单用糖皮质激素不仅耽误患者病情，且容易造成感染、栓塞、肾功能进展等严重并发症。目前对于微小病变性肾病的诊断金标准仍然是肾穿刺活检后的病理诊断，但由于肾穿刺属于有创检查，且病理诊断为微小病变性肾病后并不会改变患者的治疗方案(足量糖皮质激素治疗)，临床上急需一种可以准确、无创诊断微小病变性肾病的标志物。
[0005]微小病变性肾病诊断的另一个难点是，由于微小病变性肾病的前期病症与其他肾病的前期症状相似，很容易出现误诊。微小病变性肾病与膜性肾病、局灶节段性肾小球硬化等其他肾小球肾炎一样，大多数患者起病时为肾病综合征表现，即大量蛋白尿(大于3.5g/d)，低蛋白血症(血浆白蛋白小于30g/L)，高脂血症和明显浮肿。单独依靠临床表现和实验室检查难以将它们区别开来。然而微小病变性肾病与其他肾病的治疗方法差异比较大，在误诊之后，很可能会错失最佳治疗时间。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于利用尿沉渣miRNAs提供一种无创、快速准确诊断微小病变性肾病的方法。旨在解决目前诊断微小病变性肾病的方法或指标存在：病理诊断需要有创的肾穿刺活检术、推断性诊断无法保证准确性及耽误患者病情等一列问题。
[0007]为了解决现有技术的缺陷，第一方面，本专利技术提供miR
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5p在制备成人微小病变性肾病检测试剂盒中的应用。
[0008]第二方面，本专利技术提供一种检测成人微小病变性肾病的试剂盒，所述试剂盒含有扩增miR
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5p的引物序列。
[0009]在本专利技术所提供的检测成人微小病变性肾病的试剂盒中，所述引物序列如SEQ ID NO.1所示，用于检测尿液样本中的miR
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5p的相对表达量。
[0010]在本专利技术提供的检测成人微小病变性肾病的试剂盒中，通过荧光定量PCR检测尿液样本中miR
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5p的相对表达量。
[0011]在本专利技术提供的检测成人微小病变性肾病的试剂盒中，所述miR
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5p的相对表达量大于0.0039时，鉴定待测样本出现成人微小病变性肾病的可能性大于99％。
[0012]第三方面，本专利技术提供miR
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5p、miR
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5p和miR
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5p在制备成人微小病变性肾病与其他肾病的鉴别试剂盒中的应用。
[0013]第四方面，本专利技术提供一种区分成人微小病变性肾病与其他肾病的试剂盒，所述试剂盒中含有检测尿液样本中的miR
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5p、miR
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5p和/或miR
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5p相对表达量的引物序列。
[0014]在本专利技术提供的鉴别成人微小病变性肾病与其他肾病的试剂盒中，检测miR
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5p的引物序列如SEQ ID NO.1所示；检测miR
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5p的引物序列如SEQ ID NO.2所示；检测miR
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5p的引物序列如SEQ ID NO.3所示。
[0015]使用本专利技术提供的鉴别成人微小病变性肾病与其他肾病的试剂盒，提取肾病患者尿液样本中尿沉渣的RNA，并逆转录合成cDNA，基于SYBR Green荧光定量PCR获得所述cDNA中miR
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5p、miR
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5p和/或miR
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5p相对表达量；miR
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5p、miR
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5p或miR
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5p相对表达量显著提高的肾病患者为成人微小病变性肾病患者。
[0016]使用本专利技术提供的鉴别成人微小病变性肾病与其他肾病的试剂盒时，若所述miR
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5p相对表达量高于0.0015，或所述miR
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5p相对表达量高于0.1043，或所述miR
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5p相对表达量高于0.0719，则所述肾病患者为成人微小病变性肾病患者。
[0017]本专利技术的有益效果在于：
[0018](1)本专利技术发现了能够有效区分健康人群和微小病变性肾病的miRNA标志物miR
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5p，根据尿液样本中，miR
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5p的相对表达量可以诊断出是否患有微小病变性肾病。
[0019](2)本专利技术还发现了能够区分微小病变性肾病和其他肾病的miRNA标志物miR
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5p、miR
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5p和miR
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5p；并且三种miRNA标志物联合使用的区分效果更好。
[0020](3)本专利技术基于上述发现，提供检测试剂盒可以无创、快速、准确的诊断微小病变性肾病，对于诊断患者可立即使用足量糖皮质激素治疗，而无需有创的肾活检穿刺术和漫长等待病理结果，也较推断性诊断准确性明显增高。
[0021](4)本专利技术仅需患者提供晨尿样本，与目前肾穿刺活检术相比，具有明显无创的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miR
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5p在制备成人微小病变性肾病检测试剂盒中的应用。2.一种检测成人微小病变性肾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有扩增miR
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5p的引物序列。3.根据权利要求书2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物序列如SEQ ID NO.1所示，用于检测尿液样本中的miR
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5p的相对表达量。4.根据权利要求1
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3任一项所述的试剂盒，其特征在于，通过荧光定量PCR检测尿液样本中miR
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5p的相对表达量。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述miR
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5p的相对表达量大于0.0039时，鉴定待测样本出现成人微小病变性肾病的可能性大于99％。6.miR
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5p、miR
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5p和miR
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5p在制备成人微小病变性肾病与其他肾病的鉴别试剂盒中的应用。7.一种区分成人微小病变性肾病与其他肾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有检测尿液样本中的miR
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5p、miR
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5p和/或miR
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5p相对表达量的引物序列。8.根据权利要求7所述的试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：段智宇，蔡广研，卜茹，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第一医学中心，
类型：发明
国别省市：