一种荧光定量PCR检测生活饮用水中的贾第鞭毛虫及隐孢子虫的引物对和方法技术

本发明专利技术公开了一种荧光定量PCR检测生活饮用水中的贾第鞭毛虫及隐孢子虫的引物对和方法，属于生物检测技术领域。针对贾第鞭毛虫的Gdh基因及隐孢子虫的18s rRNA设计了特异性强的引物对，利用该引物对的检测方法使用滤膜及过滤器过滤水样，丙酮溶解浓缩后提取核酸，该富集方法成本较低、易于推广，再结合荧光定量PCR的方法，从而实现生活饮用水中“两虫”的高效检测。效检测。效检测。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光定量PCR检测生活饮用水中的贾第鞭毛虫及隐孢子虫的引物对和方法


[0001]本专利技术涉及检测
，具体涉及一种荧光定量PCR检测生活饮用水中的贾第鞭毛虫及隐孢子虫的引物对和方法。

技术介绍

[0002]贾第鞭毛虫(Giardia)与隐孢子虫(Cryptosporidium)(简称“两虫”)是两种致病性原虫类寄生虫，可寄生在人体肠道内，感染后可引起腹泻、腹痛等症状，目前尚无有效的治疗方法，病情严重时甚至还可能导致死亡，危害人体健康。介水传播是贾地鞭毛虫和隐孢子虫感染的主要渠道，两者分别以孢囊和卵囊的形式广泛存在于水环境中，且能抵抗常规水处理中的次氯酸消毒，对生活用水的安全构成了重大威胁。
[0003]我国在GB5750
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2006版《生活饮用水标准检测方法》中首次将“两虫”列入微生物学检测内容，并规定了水中限值为＜1个/10L。该方法中的检测包括三个步骤：富集浓缩、免疫磁分离纯化、染色镜检，与国际上最为常用的EPA1623标准(美国国家环保局制定)检测方法基本一致。但是，其中涉及的染色镜检法判断主观影响因素本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于荧光定量PCR检测隐孢子虫的引物对，其特征在于，包括：核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的探针。2.一种用于荧光定量PCR检测贾第鞭毛虫的引物对，其特征在于，包括：核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示的上游引物的、核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示的下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示的探针。3.一种荧光定量PCR检测生活饮用水中的贾第鞭毛虫及隐孢子虫的方法，其特征在于，提取水样中贾第鞭毛虫及隐孢子虫的DNA作为模板，以如权利要求1所述的引物对和如权利要求2所述的引物对作为扩增引物，通过实时荧光定量PCR技术对水样中的贾第鞭毛虫和隐孢子虫进行检测。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括：对水样进行前处理，所述前处理包括以下步骤：S1、微孔滤膜过滤及丙酮浓缩将混合纤维素酯滤膜正面向上置于过滤装置上，用纯水淋洗滤膜，无气泡后密封过滤装置，将采集的水样全部进行过滤；依次各用约PBST缓冲液、乙醇和纯水清洗采样桶，再将清洗液过滤；蠕动泵停止后打开过滤装置，将滤膜移至离心管中；加入丙酮，使滤膜完全溶解，在4500g、20℃条件下离心10min，吸去上清液，重复该步骤，至上清液加入纯水中无白色絮状体；向离心后的沉淀物中先加入5mL乙醇，再缓慢加入PBS缓冲液至40mL，混匀；在4500g、20℃条件下离心10m...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凤鸣，蒋靖怡，李琼，
申请(专利权)人：常州市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：