一种低温冷冻保存管和石斑鱼低温冷冻保存方法和应用技术

本申请属于超低温冷冻保存技术领域，尤其涉及一种低温冷冻保存管和石斑鱼低温冷冻保存方法和应用。本申请的低温冷冻保存管的管身底部内凹向上形成超过管身顶部的中空管且中空管的两端贯通，由于中空管两端无封堵，气流流通顺畅，并且中空管还增加了中空冷冻保存管的表面积，从而能加快降温/升温速率，提高降温/升温的均匀性，提高了冻存效果，解冻后的精子活率高，从而解决现有技术中冻存管冻存精子效果较差的技术问题。效果较差的技术问题。效果较差的技术问题。

【技术实现步骤摘要】
一种低温冷冻保存管和石斑鱼低温冷冻保存方法和应用


[0001]本申请超低温冷冻保存
，尤其涉及一种低温冷冻保存管和石斑鱼低温冷冻保存方法和应用。

技术介绍

[0002]超低温冷冻保存是精子体外保存的有效方法，保存方法主要通过精子与稀释液和保护液的混合，通过一系列的程序降温后，最终保存于液氮的过程。超低温冷冻保存技术不但可以有利于遗传资源的保存和利用，而且在养殖业中也具有重要作用。
[0003]石斑鱼是名贵海产鱼类，肉质鲜美，营养丰富，经济价值很高，具有重要的生产应用价值，是南方重要的海水养殖鱼类，然而石斑鱼雄鱼需要4
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5年才能性成熟，存在雌、雄亲鱼性成熟不同步的问题，不利于苗种的稳定供应，严重制约了石斑鱼养殖业的发展；超低温冷冻保存技术是解决石斑鱼雌、雄亲鱼性成熟不同步的有效手段，将性成熟的石斑鱼雄鱼精液收集并超低温冷冻长期保存，根据生产需要随时使用，克服了雄鱼不足及雌雄性成熟不同步等问题，保障了苗种的供给。
[0004]超低温冷冻保存技术使用的冻存容器主要是麦管和冻存管；麦管在精子冻存中具有更好的效果，但是因为结构复杂、容量较小，难以冻存大量精液；冻存管容积较大，降温效果不好，精液冻存效果较差。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本申请提供了一种低温冷冻保存管和石斑鱼低温冷冻保存方法和应用，用于解决现有技术中冻存管冻存精子效果较差的技术问题。
[0006]本申请第一方面提供了一种低温冷冻保存管，包括管身和管盖；
[0007]所述管身的底部内凹向上形成超过管身的顶部的中空管；
[0008]所述中空管的两端贯通；
[0009]所述管盖设置有与中空管对应的管盖通孔；
[0010]所述管盖和管身螺纹连接。
[0011]优选的，所述低温冷冻保存管还包括橡皮封闭圈；
[0012]所述橡皮封闭圈位于所述管身的顶部；
[0013]所述橡皮封闭圈的外径和所述管身的外径相同。
[0014]需要说明的是，通过橡皮封闭圈能提高低温冷冻保存管的密封性。
[0015]优选的，所述管身的外径为1～1.5cm，所述管身的厚度为0.05～0.1cm，所述管身的高度为3.5～4cm；
[0016]所述中空管的外径为0.2～0.4cm，高度为4.2～4.8cm；
[0017]所述管盖通孔的直径为0.2～0.4cm。
[0018]本申请第二方面提供了一种石斑鱼超低温冷冻保存方法，采用上述中空冷冻保存管作为冻存容器进行超低温冷冻保存，包括以下步骤：
[0019]步骤S1.将石斑鱼精液与冷冻保护剂混合后，装入所述低温冷冻保存管中密封；
[0020]步骤S2.将装有石斑鱼精液与冷冻保护剂的低温冷冻保存管在液氮面上方预冻存；
[0021]步骤S3.将预冻存后的装有石斑鱼精液与冷冻保护剂的低温冷冻保存管装入液氮中超低温冷冻保存；
[0022]所述冷冻保护剂包括抗冻剂和保护液。
[0023]优选的，步骤S1中，所述抗冻剂包括二甲亚砜；
[0024]所述保护液包括葡萄糖和氯化钠。
[0025]优选的，步骤S1中，所述保护液中葡萄糖的浓度为0.3mol/L，氯化钠的浓度为0.1mol/L；
[0026]所述冷冻保护剂中二甲亚砜与保护液的体积比为1:10。
[0027]优选的，步骤S1中，所述石斑鱼精液与冷冻保护剂的体积比为2：1。
[0028]优选的，步骤S2中，所述预冻存的时间为10min，高度为3～7cm。
[0029]优选的，所述S1中，所述石斑鱼精液与冷冻保护剂的总体积为700μL～1800μL。
[0030]本申请第三方面提供了所述石斑鱼超低温冷冻保存方法在石斑鱼养殖中的应用，所述应用具体包括步骤：
[0031]步骤S4.将装有石斑鱼精液与冷冻保护剂的低温冷冻保存管从液氮中取出解冻；
[0032]步骤S5.将解冻后的石斑鱼精液与石斑鱼卵在清水中混合搅拌至石斑鱼卵受精。
[0033]优选的，步骤S4中，所述解冻为将装有石斑鱼精液与冷冻保护剂的中空冷冻保存管在40℃水浴2分钟。
[0034]综上所述，本申请提供了一种低温冷冻保存管和石斑鱼超低温冷冻保存方法和应用，低温冷冻保存管包括管身和管盖，管身底部内凹向上形成超过管身顶部的中空管且中空管的两端贯通，管盖上设置有与中空管对应的通孔，管盖和管身螺纹连接，由于中空管两端无封堵，气流流通顺畅，并且中空管还增加了中空冷冻保存管的表面积，从而能加快降温/升温速率，提高降温/升温的均匀性，在冻存大体积的精液，例如冻存体积大于900μL时，中空管通过提高气流的流通顺畅性，提高比表面积，防止热的空气积压在中空管状结构内导致降温/升温不均匀，提高了冻存效果，解冻后的精子活率高，用于解决现有技术中冻存管冻存精子效果较差的技术问题。
附图说明
[0035]为了更清楚地说明本申请具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本申请的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0036]图1为本申请实施例提供的低温冷冻保存管中管身、管盖以及橡皮封闭圈示意图；
[0037]图2为本申请实施例提供的低温冷冻保存管横切面示意图；
[0038]图3为本申请实施例3提供的不同保护液的低温冷冻保存效果对比图；
[0039]图4为本申请实施例3提供的不同抗冻液的低温的冷冻保存效果对比图；
[0040]图5为本申请实施例3提供的不同抗冻剂稀释比例的低温冷冻保存效果对比图；
[0041]图6为本申请实施例3提供的不同冷冻保护剂稀释比例的低温冷冻保存效果对比图；
[0042]图7为本申请实施例3提供的低温冷冻保存管距液氮液面不同高度的低温冷冻保存效果对比图；
[0043]图8为本申请实施例提供的实施例1所述低温冷冻保存管和不具有中空管的常规冻存管的低温冷冻保存效果对比图。
具体实施方式
[0044]本申请提供了一种低温冷冻保存管和石斑鱼超低温冷冻保存方法和应用，用于解决现有技术中冻存管冻存精子效果较差的技术问题。
[0045]下面将结合附图对本申请的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0046]实施例1
[0047]本实施例提供了一种低温冷冻保存管，其结构如图1
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2所示，低温冷冻保存管包括管身和管盖；管身的底部内凹向上形成超过管身的顶部的中空管；中空管的两端贯通，管盖设置有与中空管对应的管盖通孔，管盖和管身螺纹连接，螺纹连接方式为管盖上设有外螺纹，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种低温冷冻保存管，其特征在于，包括管身和管盖；所述管身的底部内凹向上形成超过管身的顶部的中空管；所述中空管的两端贯通；所述管盖设置有与中空管对应的管盖通孔；所述管盖和管身螺纹连接。2.根据权利要求1所述的一种低温冷冻保存管，其特征在于，所述低温冷冻保存管还包括橡皮封闭圈；所述橡皮封闭圈位于所述管身的顶部；所述橡皮封闭圈的外径和所述管身的外径相同。3.根据权利要求1所述的一种低温冷冻保存管，其特征在于，所述管身的外径为1～1.5cm，所述管身的厚度为0.05～0.1cm，所述管身的高度为3.5～4cm；所述中空管的外径为0.2～0.4cm，高度为4.2～4.8cm；所述管盖通孔的直径为0.2～0.4cm。4.一种石斑鱼超低温冷冻保存方法，其特征在于，包括步骤：步骤S1.将石斑鱼精液与冷冻保护剂混合后，装入权利要求1
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3任一项所述低温冷冻保存管中密封；步骤S2.将装有石斑鱼精液与冷冻保护剂的低温冷冻保存管在液氮面上方预冻存；步骤S3.将预冻存后的装有石斑鱼精液与冷冻保护剂的低温冷冻保存管装入液氮中超低温冷冻保存；所述冷冻保护剂包括抗冻剂和保护液。5.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓春，杨扬，蒙子宁，王同，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：