一种罗汉果根皂苷组合物及其分离方法技术

本发明专利技术涉及中药成分提取分离纯化技术领域，具体而言，涉及一种罗汉果根皂苷组合物及其分离方法。皂苷为葫芦烷四环三萜化合物，结构新颖，活性更好。该分离方法对经过超声处理的罗汉果块根样品进行大孔树脂洗脱，再采用液

【技术实现步骤摘要】
一种罗汉果根皂苷组合物及其分离方法


[0001]本专利技术涉及中药成分提取分离纯化
，具体而言，涉及一种罗汉果根皂苷组合物及其分离方法。

技术介绍

[0002]罗汉果[Siraitia grosvenorii(Swingle)C.Jeffrey]是广西桂林道地的药食两用植物，也是广西未来重点发展的桂十味药材之首。罗汉果产业已成桂林地区重要的乡村振兴支柱产业，产值达百亿元。罗汉果在民间的药用历史已有300多年，临床用于治疗糖尿病、肺结核、急、慢性气管炎等疾病。罗汉果皂苷即葫芦烷三萜皂苷是罗汉果的主要活性成分，能够缓解结肠炎、神经炎症、急性胰腺炎等多种炎症疾病，具有改善胰岛β细胞功能、改善胰岛素抵抗、抑制肠道内葡萄糖的吸收的降糖作用。
[0003]近年来，罗汉果产业得到迅速扩展，罗汉果的种植面积从2016年12万亩发展到2021年的25万亩。目前罗汉果栽培方式为一年一种，其块根每年都要被挖掉。随着种植面积的增多，产生越来越多的罗汉果根资源。据《中华本草》等文献记载，罗汉果根具有“利湿止泻；舒筋；主腹泻；舌胖；脑膜炎后遗症”的功能，是桂林地区民间用于治疗肝炎、疮疖的一种标志性药材。罗汉果根主要成分亦为葫芦烷三萜皂苷。然而有关罗汉果根的研究十分有限，尤其是药理活性的研究，导致它直接通常被丢弃，造成很大的资源浪费。
[0004]现有罗汉果根相关研究中，主要集中在罗汉果根的化学成分分离鉴定上，王雪芬、斯建勇、陈迪华等人先后从罗汉果根中分离得到失碳的葫芦烷四环三萜酸(罗汉果酸甲
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戊、Siraitic F),李典鹏等人从中分离得到Siraitic IIB和Siraitic IIC两个皂苷类成分。CN200810107427.6公开了一种从罗汉果根中提取的皂苷类化合物、其制备方法及其用途，该方法采用80％
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100％的甲醇或乙醇加热回流提取罗汉果根，用大孔树脂富集皂苷成分，再用硅胶柱层析分离罗汉果根皂苷类化合物Siraitic acid IIB和Siraitic acid II C，化合物Siraitic acid IIB对肺癌细胞A549和肝癌细胞Hep
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G2有明显的抑制作用,化合物Siraiticacid II C对肝癌细胞Hep
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G2也有明显抑制作用。
[0005]然而，已经分离的化合物种类较少，未能全面阐明罗汉果根的化学成分及其活性，影响罗汉果根进一步的开发利用。同时，对罗汉果根皂苷成分的分离方法很有限，且采用的硅胶柱反复分离，不仅耗时，同时由于硅胶对皂苷成分死吸附严重，造成回收率低。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种罗汉果根皂苷组合物及其分离方法。
[0007]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0008]本专利技术提供一种罗汉果根皂苷组合物的分离方法，包括以下步骤：
[0009]S1、超声提取：获取罗汉果块根粉末，将所述罗汉果块根粉末与甲醇或乙醇溶液混合，并进行超声提取，获得罗汉果根提取液；
[0010]S2、大孔树脂吸附与洗脱：对所述罗汉果根提取液进行大孔树脂吸附与洗脱，得到
大孔树脂洗脱液，再对所述大孔树脂洗脱液进行浓缩，得到罗汉果根皂苷组合物粗品；
[0011]S3、液－液萃取：对所述罗汉果根皂苷组合物粗品进行液－液萃取，将得到的水相进行浓缩和干燥，得到罗汉果根皂苷组合物精制品；
[0012]S4、高速逆流色谱：对所述罗汉果根皂苷组合物精制品进行高速逆流色谱分离，将分离出的馏分按照流出时间的先后顺序分为第一混合馏分和第二混合馏分，将所述第一混合馏分和所述第二混合馏分分别进行浓缩干燥，再分别采用甲醇溶液溶解；
[0013]所述高速逆流色谱的洗脱总时间为240分钟，以第160分钟前洗脱出的馏分为所述第一混合馏分，以第160分钟之后洗脱出的馏分为所述第二混合馏分；
[0014]S5、半制备高效液相色谱分离：将溶解后的所述第一混合馏分和所述第二混合馏分分别进行半制备高效液相色谱分离，得到两种分离产物；
[0015]其中，对所述第一混合馏分进行半制备高效液相色谱分离使用的流动相为体积分数30％的乙腈水溶液；对所述第二混合馏分进行半制备高效液相色谱分离使用的流动相为体积分数35％的乙腈水溶液；
[0016]S6、将两种所述分离产物混合，得到所述罗汉果根皂苷组合物。
[0017]进一步，所述步骤S1中，按照固液比为30:1～50:1mL/g的比例向所述罗汉果块根粉末中加入体积百分比为40～60％的甲醇或乙醇溶液并混合均匀；所述超声提取的频率为10～50kHz，温度为30～50℃，超声提取时间为30
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60min。
[0018]进一步，所述步骤S1中，所述罗汉果根提取液中的甲醇或乙醇溶液占所述罗汉果根提取液体积分数的15
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20％。
[0019]进一步，所述步骤S2中，所述洗脱为梯度洗脱；洗脱程序为，依次采用体积分数为20％、40％和70％的甲醇水溶液进行洗脱，每次洗脱使用的甲醇水溶液体积为2～3倍柱体积；以体积分数为70％的甲醇水溶液洗脱的溶液作为所述大孔树脂洗脱液。
[0020]进一步，所述步骤S3中，所述的液－液萃取采用的溶剂是含有正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的四相溶液，其体积与所述罗汉果根皂苷组合物粗品体积的比例为1:30～50；所述四相溶液中，正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为3:7:3:7。
[0021]进一步，所述步骤S4中，所述高速逆流色谱法采用的分离溶剂体系中含有氯仿、甲醇和水，三者的体积比为2:2:1；
[0022]所述高速逆流色谱分离的上相为固定相，下相为流动相；所述高速逆流色谱分离的转速为860r/min，洗脱模式为洗脱
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反推模式，洗脱时间180min,流速为2mL/min，反推时间为60min，流速为5mL/min。
[0023]进一步，所述步骤S4中，反推分离出的馏分按照流出时间依次以10mL/份进行收集，并根据流出顺序进行编号，得到编号为1～66的66个馏分；将编号为1～28的馏分弃去，将编号为29～32的馏分混合得到所述第一混合馏分，将编号为47～60的馏分混合得到所述第二混合馏分。
[0024]进一步，所述步骤S5中，对所述第一混合馏分和所述第二混合馏分进行半制备高效液相色谱分离的流动相流速均为3.0mL/min，洗脱程序均为等度洗脱，检测波长均为230nm。
[0025]本专利技术还提供一种罗汉果根皂苷组合物，采用上述的分离方法得到。
[0026]进一步，从所述第一混合馏分分离出的分离产物中包括单体化合物A、单体化合物
B、单体化合物C和单体化合物D；从所述第二混合馏分分离出的分离产物中包括单体化合物E、单体化合物F、单体化合物G和单体化合物H；
[0027]所述化合物A的结构式如式(1)所示：
[0028][0029]所述式(1)中，R为<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种罗汉果根皂苷组合物的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、超声提取：获取罗汉果块根粉末，将所述罗汉果块根粉末与甲醇或乙醇溶液混合，并进行超声提取，获得罗汉果根提取液；S2、大孔树脂吸附与洗脱：对所述罗汉果根提取液进行大孔树脂吸附与洗脱，得到大孔树脂洗脱液，再对所述大孔树脂洗脱液进行浓缩，得到罗汉果根皂苷组合物粗品；S3、液－液萃取：对所述罗汉果根皂苷组合物粗品进行液－液萃取，将得到的水相进行浓缩和干燥，得到罗汉果根皂苷组合物精制品；S4、高速逆流色谱：对所述罗汉果根皂苷组合物精制品进行高速逆流色谱分离，将分离出的馏分按照流出时间的先后顺序分为第一混合馏分和第二混合馏分，将所述第一混合馏分和所述第二混合馏分分别进行浓缩干燥，再分别采用甲醇溶液溶解；所述高速逆流色谱的洗脱总时间为240分钟，以第160分钟前洗脱出的馏分为所述第一混合馏分，以第160分钟之后洗脱出的馏分为所述第二混合馏分；S5、半制备高效液相色谱分离：将溶解后的所述第一混合馏分和所述第二混合馏分分别进行半制备高效液相色谱分离，得到两种分离产物；其中，对所述第一混合馏分进行半制备高效液相色谱分离使用的流动相为体积分数30％的乙腈水溶液；对所述第二混合馏分进行半制备高效液相色谱分离使用的流动相为体积分数35％的乙腈水溶液；S6、将两种所述分离产物混合，得到所述罗汉果根皂苷组合物。2.根据权利要求1所述一种罗汉果根皂苷组合物的分离方法，其特征在于，所述步骤S1中，按照固液比为30:1～50:1mL/g的比例向所述罗汉果块根粉末中加入体积百分比为40～60％的甲醇或乙醇溶液并混合均匀；所述超声提取的频率为10～50kHz，温度为30～50℃，超声提取时间为30
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60min。3.根据权利要求1所述一种罗汉果根皂苷组合物的分离方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述罗汉果根提取液中的甲醇或乙醇溶液占所述罗汉果根提取液体积分数的15
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20％。4.根据权利要求1所述一种罗汉果根皂苷组合物的分离方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述洗脱为梯度洗脱；洗脱程序为，依次采用体积分数为20％、40％和70％的甲醇水溶液进行洗脱，每次洗脱使用的甲醇水溶液体积为2～3倍柱体积；以体积分数为70％的甲醇水溶液洗脱的溶液作为所述大孔树脂洗脱液。5.根据权利要求1所述一种罗汉果根皂苷组合物的分离方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述的液－液萃取采用的溶剂是含有正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的四相溶液，其体积与所述罗汉果根皂苷组合物粗品体积的比例为1:30～50；所述四相溶液中，正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为3:7:3:7。6.根据权利要求1～5任意一项所述一种罗汉果根皂苷组合物的分离方法，其特征在于，所述步骤S4中，所述高速逆流色谱法采用的分离溶剂体系中含有氯仿、甲醇和水，三者的体积比为2:2:1；所述高速逆流色谱分离的上相为固定相，下相为流动相；所述高速逆流色谱分离的转速为860r/min，洗脱模式为洗脱
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反推模式，洗脱时间180min,流速为2mL/min，反推时间为60min，流速为5mL/min。7.根据权利要求6所述一种罗汉果根皂苷组合物的分离方法，其特征在于，所述步骤S4
中，反推分离出的馏分按照流出时间依次以10mL/份进行收集，并根据流出顺序进行编号，得到编号为1～66的66个馏分；将编号为1～28的馏分弃去，将编号为29～32的馏分混合得到所述第一混合馏分，将编号为47～60的馏分混合得到所述第二混合馏分。8.根据权利要求7所述一种罗汉果根皂苷组合物的分离方法，其特征在于，所述步骤S5中，对所述第一混合馏分和所述第二混合馏分进行半制备高效液相色谱分离的流动相流速均为3.0mL/min，洗脱程序均为等度洗脱，检测波长均为230nm。9.一种罗汉果根皂苷组合物，其特征在于，采用权利要求1～8任意一项所述的分离方法得到。10.根据权利要求9所述一种罗汉果根皂苷组合物，其特征在于，从所述第一混合馏分分离出的分离产物中包括单体化合物A、单体化合物B、单体化合物C和单体化合物D；从所述第二混合馏分分离出的分离产物中包括单体化合物E、单体化合物F、单体化合物G和单体化合物H；所述化合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢凤来，李典鹏，宋静茹，蒋小华，颜小捷，韦玉璐，陈月圆，羊学荣，杨子明，
申请(专利权)人：广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，
类型：发明
国别省市：