一种泰乐菌素聚酮合酶酰基转移酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种泰乐菌素聚酮合酶酰基转移酶突变体及其应用，涉及生物工程领域，包括第一突变体、第二突变体或第三突变体；其氨基酸序列分别如SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。公开了该突变体的编码基因、重组载体和重组菌以及其在催化丙二酰

【技术实现步骤摘要】
一种泰乐菌素聚酮合酶酰基转移酶突变体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，尤其涉及一种泰乐菌素聚酮合酶酰基转移酶突变体及其应用。

技术介绍

[0002]聚酮化合物是一类由细菌、放线菌、真菌或植物产生的次生代谢产物，其中包括大环内酯类、四环素类、蒽环类、聚醚类等，具有抗真菌、抗感染、抗肿瘤、免疫抑制等活性。聚酮化合物由聚酮合酶催化合成，可分为I型PKS、II型PKS和III型PKS。I型PKS由不同的模块组成，每个模块包括一套结构域以用来延伸或者修饰聚酮链。酰基转移酶结构域，酮基合成酶结构域和酰基载体蛋白结构域构成了三个核心结构域，每个酶结构域在生长的聚酮化合物的延伸和修饰中起不同的作用。
[0003]酰基转移酶(acyltransferase，AT)催化酰基底物形成AT
‑
酰基中间物并释放出辅酶A，AT
‑
酰基中间物将酰基转移给酰基载体蛋白(acyl carrier protein，ACP)。AT活性中心的组氨酸使催化氨基酸丝氨酸去质子化，增强丝氨酸的亲核性，促使丝氨酸攻击底物羰基碳形成A本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种泰乐菌素聚酮合酶酰基转移酶突变体，其特征在于，所述泰乐菌素聚酮合酶酰基转移酶突变体包括第一突变体、第二突变体或第三突变体；所述第一突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述第二突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述第三突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。2.一种如权利要求1所述的泰乐菌素聚酮合酶酰基转移酶突变体的编码基因。3.一种如权利要求2所述的编码基因构建的重组载体。4.一种如权利要求3所述的重组载体转化制备的重组菌。5.一种泰乐菌素聚酮合酶酰基转移酶结构域TylAT5蛋白的可溶性表达方法，其特征在于，所述可溶性表达方法包括以下步骤：步骤1、将重组菌在LB液体培养基中，37℃摇床培养6h；转入所述LB液体培养基中，37℃摇床培养至OD
600
为0.4～0.6，加入IPTG，16℃诱导过夜；室温，离心收集菌体；步骤2、将步骤1收集到的菌体用缓冲液重悬菌体，冰浴超声破碎，4℃离心40min，取上清；用镍柱亲和层析纯化带有组氨酸标签的目标蛋白，上清液流穿两次，用第一咪唑缓冲液洗脱杂蛋白，用第二咪唑缓冲液洗脱目标蛋白，得到洗脱后的溶液；步骤3、步骤2得到的洗脱后的溶液4℃离心，收集沉淀，用快速蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑舰艇，黄舒昕，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：