与LDL-C相关的基因及其体外检测试剂、制剂或试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术涉及生物工程中血脂异常相关基因技术领域，是一种与LDL

【技术实现步骤摘要】
与LDL
‑
C相关的基因及其体外检测试剂、制剂或试剂盒和应用


[0001]本专利技术涉及生物工程中血脂异常相关基因
，是一种与LDL
‑
C相关的基因及其体外检测的试剂、制剂或试剂盒和应用。

技术介绍

[0002]高胆固醇血症是心血管疾病的主要危险因素之一，尤其低密度脂蛋白胆固醇（简称LDL
‑
C）升高是动脉粥样硬化性心血管疾病发生发展的最危险因素之一，FOURIER及ODYSSEY研究都表明最大程度降低LDL
‑
C水平能带来最大心血管获益。虽然近年来高胆固醇血症的诊断和治疗有了很大发展，新的降脂治疗的化学及生物制剂不断涌现，降脂治疗大大改善了高胆固醇血症患者的预后，但其病因与发病机制仍不清楚。自上世纪70年代科学家发现低密度脂蛋白受体（简称LDLR）基因突变引发家族性高胆固醇血症（简称FH）和早发心血管疾病以来，人们对高胆固醇血症的认识也有了很大的提高，已经认识到高胆固醇血症不只是一种单因素疾病，而是由多种内源性及外源性因素共同决定的复杂性疾病，除了传统的危险因素，如高脂饮食、高血压，糖尿病，吸烟等环境因素外，遗传因素在高胆固醇血症发生发展过程中也扮演着重要作用。目前，通过全基因组关联研究（简称GWAS）已经确立了157个与脂质水平相关的基因。我们前期采用全外显子测序（简称WES）结合家系研究，通过生信分析筛选出影响肠道胆固醇摄取的新基因LIMA1；发现并验证了LDLR的诱导降解子IDOL基因。
[0003]胆固醇代谢主要分为合成，摄取，外排，酯化等四个途径。其中ATP结合盒转运蛋白超家族在胆固醇外排中发挥关键作用。GWAS、WES及基础研究等已经发现并证实ABCA1、ABCG1、ABCG5、ABCG8等ATP结合盒转运蛋白超家族成员与胆固醇外排相关，基因敲除的动物动脉粥样硬化程度明显加重。ABCA1及ABCG1在全身组织广泛表达，其中在巨噬细胞中高表达的ABCA1和ABCG1通过协调胆固醇的外排及逆向运输降解等可能作用机制影响胆固醇代谢，这两种基因缺失会导致巨噬细胞内脂质大量沉积，从而加重动脉粥样硬化。ABCG5和ABCG8几乎只在肝细胞和肠细胞的顶端表面表达，在那里它们作为异二聚体发挥作用，介导中性甾醇（包括植物甾醇和胆固醇）分别排泄到胆汁和肠腔中。ABCG5或ABCG8的单个或组合突变会导致谷固醇血症。
[0004]同时，ABCC1基因位于16p13.11，有35个外显子，是一种蛋白质编码基因，其编码的蛋白质属于ATP结合盒转运蛋白超家族成员，在人体全身组织广泛表达，与已经证实的参与胆固醇外排的ABCA1相同，都在单核巨噬细胞有高表达。ABCC1也参与细胞膜内外的跨膜物质转运，如转运类固醇激素和胆汁盐等，也有报道其参与脂肪酸代谢。因此，研究分析ABCC1基因也更有助于发现高胆固醇血症新的致病相关基因。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种与LDL
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C相关的基因及其体外检测的试剂、制剂或试剂盒和应用，克服了上述现有技术之不足，其更有助于发现高胆固醇血症新的致病相关基因，对预防
和治疗血脂异常相关疾病具有重大意义。
[0006]本专利技术的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种与LDL
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C相关的基因，即rs35605位点突变的ABCC1基因，rs35605位点突变的ABCC1基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO: 1所示。
[0007]本专利技术的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种体外检测与LDL
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C相关的基因的试剂，该试剂用于检测ABCC1基因rs35605位点的突变，该试剂包括如下引物：上游引物：5'ACTGCTCCTAGGATGATGACTCTCACT3'下游引物：5'CCTCTCGGAAGTCGCCCCAGC3'。
[0008]下面是对上述专利技术技术方案之二的进一步优化或/和改进：上述该试剂为聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性分析相结合的试剂。
[0009]本专利技术的技术方案之三是通过以下措施来实现的：一种含有体外检测与LDL
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C相关的基因的试剂的制剂或试剂盒，该制剂或试剂盒包含试剂、PCR扩增酶及相应缓冲液、PspPI限制性内切酶和相应的酶切图谱。
[0010]上述试剂包括如下引物：上游引物：5'ACTGCTCCTAGGATGATGACTCTCACT3'下游引物：5'CCTCTCGGAAGTCGCCCCAGC3'。
[0011]本专利技术的技术方案之四是通过以下措施来实现的：一种体外检测与LDL
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C相关的基因的试剂在制备用于体外检测与LDL
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C相关的基因的制剂或试剂盒中的应用。
[0012]上述该制剂或试剂盒包含试剂、PCR扩增酶及相应缓冲液、PspPI限制性内切酶和相应的酶切图谱。
[0013]上述试剂包括如下引物：上游引物：5'ACTGCTCCTAGGATGATGACTCTCACT3'下游引物：5'CCTCTCGGAAGTCGCCCCAGC3'。
[0014]本专利技术公开了低密度脂蛋白胆固醇相关基因以及其体外检测系统和应用，该体外检测系统除了可以用于体外检测低密度脂蛋白胆固醇相关基因的多态性外，还可以用于检测、预防、诊断或治疗高胆固醇血症，从而降低高胆固醇血症的发生率，对预防和治疗血脂异常相关疾病具有重大意义。
附图说明
[0015]附图1为本专利技术ABCC1 rs35605位点的酶切图谱。
具体实施方式
[0016]本专利技术不受下述实施例的限制，可根据本专利技术的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。本专利技术中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现有技术中公知公用的化学试剂和化学用品。
[0017]下面结合实施例对本专利技术作进一步描述：实施例1：该与LDL
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C相关的基因，即rs35605位点突变的ABCC1基因，rs35605位点突变的ABCC1基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO: 1所示。
[0018]本专利技术中含有ABCC1基因的待测样品可以从来自试验者的细胞获得，如来自血液、
尿、唾液、胃液、头发、活组织检查和尸体解剖材料的细胞，优选来自血液。
[0019]实施例2：该体外检测与LDL
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C相关的基因的试剂，该试剂用于检测ABCC1基因rs35605位点的突变，该试剂包括如下引物：上游引物：5'ACTGCTCCTAGGATGATGACTCTCACT3'下游引物：5'CCTCTCGGAAGTCGCCCCAGC3'。
[0020]实施例3：作为上述实施例2的优化，该试剂为聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性分析相结合的试剂。
[0021]本专利技术中，所谓“基因多态性”指的是在人群中，各个体基因的核苷酸序列存在的差异。本领域技术人员已知，本专利技术所述的多态性位点为单核苷酸多态性（SNP）位点，即基因组序列中单本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与LDL
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C相关的基因，其特征在于与LDL
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C相关的基因即rs35605位点突变的ABCC1基因，rs35605位点突变的ABCC1基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO: 1所示。2.一种体外检测根据权利要求1所述的与LDL
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C相关的基因的试剂，其特征在于该试剂用于检测ABCC1基因rs35605位点的突变，该试剂包括如下引物：上游引物：5'ACTGCTCCTAGGATGATGACTCTCACT3'下游引物：5'CCTCTCGGAAGTCGCCCCAGC3'。3.根据权利要求2所述的体外检测与LDL
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C相关的基因的试剂，其特征在于该试剂为聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性分析相结合的试剂。4.一种含有根据权利要求2或3所述的体外检测与LDL
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C相关的基因的试剂的制剂或试...

【专利技术属性】
技术研发人员：付真彦，刘森，刘成，金梦龙，孟凡华，曹紫晨，
申请(专利权)人：新疆医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：