鸡遗传抗B亚群禽白血病病毒感染的分子标记、筛选/鉴定方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种鸡遗传抗B亚群禽白血病病毒感染的分子标记、筛选/鉴定方法及其应用，该方法包括：提取待测样本基因组DNA，扩增tvb受体基因片段，然后进行测序，判断tvb受体基因第3747位是否存在碱基G的缺失。该方法能够快速、准确判定检测样本为ALV

【技术实现步骤摘要】
鸡遗传抗B亚群禽白血病病毒感染的分子标记、筛选/鉴定方法及其应用


[0001]本专利技术涉及家禽抗病育种
，具体涉及一种鸡遗传抗B亚群禽白血病病毒感染的分子标记、筛选/鉴定方法及其应用。

技术介绍

[0002]禽白血病是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus，ALV)引起一类禽免疫抑制性肿瘤性传染病。B亚群禽白血病病毒(ALV
‑
B)是引起我国鸡群发生禽白血病的主要病原。ALV
‑
B感染可引起感染鸡群发生特征性肿瘤而死亡，致使感染鸡群生产性能下降，可引起感染鸡群产生严重的免疫抑制而极易继发禽流感、新城疫等其他病毒性疾病和大肠杆菌、沙门氏菌等细菌性疾病，给我国家禽产业造成了巨大的经济损失。ALV
‑
B主要通过垂直传播，其感染可从曾祖代(纯系)
→
祖代
→
父母代
→
商品代逐代放大，每代感染率扩大约5％
‑
20％，1只曾祖代(纯系)种鸡感染ALV
‑
B后可传染给24万只商品鸡，禽白血病已成为危害我国家禽种业安全最大的疾病。目前，该病尚无商品化疫苗和有效的治疗方法，主要通过种群净化措施进行防控，但种群净化周期长(至少8
‑
10年)、费用高(每只种鸡净化费用约500元)，且净化后阴性鸡群依然面临着再次感染ALV的风险，很难维持禽白血病的净化成效，且会陷入病原
‑
动物
‑
检测人员持续的斗争。近年来禽白血病的流行病学调查研发发现ALV
‑
B在我国地方鸡种、黄羽肉鸡、白羽肉鸡、蛋鸡等不同类型鸡中发生与流行，该病已成为威胁我国养鸡业(尤其是种鸡业)可持续健康发展的重大疾病之一。因此，开展控制禽白血病的技术创新，研发更适合防控我国禽白血病的新策略已迫在眉睫。国外已有研究证实，从宿主遗传抗性角度研究禽白血病的抗病育种已成为防控该病的有效策略。
[0003]鸡tvb受体基因编码Tvb受体蛋白，介导ALV
‑
B侵入宿主细胞，继而发生感染。tvb受体基因决定宿主细胞对ALV
‑
B感染的易感性或抗性，其遗传突变可能会导致Tvb受体蛋白表达的完全缺失或表达一个不适宜作为ALV
‑
B受体的缺陷型Tvb受体蛋白，从而引起鸡抗ALV
‑
B的感染。因此，发掘并鉴定鸡抗ALV
‑
B感染的分子标记，并应用于筛选抗ALV
‑
B感染的鸡育种素材，用以培育抗B亚群禽白血病鸡品种(系)是实现B亚群禽白血病抗病育种的关键所在。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的是提供一种鸡抗B亚群禽白血病病毒感染的分子标记、筛选/鉴定方法及其应用，可克服现有技术措施不能完全控制B亚群禽白血病在我国鸡群发生与流行的不足。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种筛选/鉴定B亚群禽白血病遗传抗性鸡的方法，包括：提取待测样本基因组DNA，扩增tvb受体基因片段，然后进行测序，判断tvb受体基因第3747位是否存在碱基G的缺失。
[0006]上述方法具体包括以下步骤：
[0007]提取待测样本DNA，扩增tvb受体基因片段，测序判断是否为遗传抗ALV
‑
B感染鸡；
[0008]若检测样本tvb受体基因第3747位碱基位置存在纯合缺失G突变tvb
delG/delG
，说明该个体具有抗ALV
‑
B感染的表型，则该个体为遗传抗ALV
‑
B感染鸡；
[0009]若检测样本tvb受体基因第3747位碱基位置没有发生G缺失突变，说明该个体的基因型为野生型tvb
s1/s1
，则该个体为ALV
‑
B易感染鸡；
[0010]若检测样本tvb受体基因第3747位碱基位置存在杂合插入G突变tvb
s1/delG
，说明该个体为ALV
‑
B易感染鸡，但基因型均为tvb
s1/delG
种公鸡、种母鸡配种后产生的下一代可以产生基因型为tvb
delG/delG
的个体，从而产生抗ALV
‑
B感染鸡个体。
[0011]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进：
[0012]进一步，上述扩增过程所用扩增体系包括：DNA模板1μL，10
×
buffer 2.5μL，dNTPs2μL，上下游检测引物1μL，KOD
‑
FX 0.5μL，最后用ddH2O补至25μL。
[0013]进一步，上述扩增过程所用扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃后延伸5min，最后4℃保存。
[0014]上述方法可用于选育遗传抗B亚群禽白血病鸡品种/品系。
[0015]本专利技术还提供一种鸡遗传抗B亚群禽白血病病毒感染的分子标记，该分子标记为tvb受体基因第3747位的碱基G缺失。
[0016]tvb受体基因DNA序列可GenBank登录号：NC_052553.1，其在第3747位的碱基G缺失，简称为tvb
3747delG
突变位点。
[0017]本专利技术还提供了用于检测上述分子标记的引物，该引物的核苷酸序列如下：
[0018]正向引物F：5
’‑
GAGCCCGAGCAGAGCTGTGT
‑3’
(SEQ ID NO：1)
[0019]反向引物R：5
’‑
CAGCTTCCAACTCACTCGG
‑3’
(SEQ ID NO：2)。
[0020]上述分子标记和/或引物在筛选/鉴定遗传抗B亚群禽白血病病毒感染鸡中的应用。
[0021]一种检测/筛选遗传抗B亚群禽白血病鸡的试剂盒，该试剂盒包括上述引物。
[0022]上述试剂盒在筛选培育遗传抗B亚群禽白血病鸡品种/品系育种素材中的应用。
[0023]本专利技术具有以下有益效果：
[0024]本专利技术分析了我国鸡种(包括15个地方鸡种和15黄羽肉鸡品系共1998份血液样品)tvb受体基因的遗传变异情况，发现我国鸡种中tvb受体基因DNA序列(GenBank登录号：NC_052553.1，具体见SEQ ID NO：19)第3747位的碱基出现G缺失的自然突变，简称为tvb
3747delG
突变位点。
[0025]基于上述研究，然后从体外、体内实验两个层面证实了tvb
3747delG
自然突变引起鸡抗ALV
‑
B的感染。具体原因在于tvb
3747delG
突变位于tvb受体基因第4外显子区域，该突变在tvb受体基因编码序列C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种筛选/鉴定B亚群禽白血病遗传抗性鸡的方法，其特征在于，包括：提取待测样本基因组DNA，扩增tvb受体基因片段，然后进行测序，判断tvb受体基因第3747位是否存在碱基G的缺失。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，若检测样本tvb受体基因第3747位碱基位置存在纯合缺失G突变tvb
delG/delG
，则该个体为遗传抗ALV
‑
B感染鸡；若检测样本tvb受体基因第3747位碱基位置没有发生G缺失突变，则该个体为ALV
‑
B易感染鸡；若检测样本tvb受体基因第3747位碱基位置存在杂合插入G突变tvb
s1/delG
，则该个体为ALV
‑
B易感染鸡，但其携带ALV
‑
B遗传抗性隐性基因。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，扩增过程所用扩增体系包括：DNA模板1μL，10
×
buffer 2.5μL，dNTPs 2μL，上下游检测引物1μL，KOD
‑
FX 0.5μL，最后用ddH2O补至25μL。4.根据权利要求1所述的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢青梅，陈伟国，李文雪，陈胜，徐慧娟，
申请(专利权)人：岭南现代农业科学与技术广东省实验室河源分中心，
类型：发明
国别省市：