用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒及方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学检测领域，具体涉及用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒及方法，本方法包括采集待测者外周静脉血，提取DNA，采用检测HLA

【技术实现步骤摘要】
用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学分析检测
，具体涉及一种用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]原发肾病综合征(Primary nephrotic syndrome，PNS)是引起我国儿童慢性肾脏病最为常见的原发性肾小球疾病，口服糖皮质激素(glucocorticosteroid)一直是PNS公认的一线治疗方法。77.6％
‑
91.0％的患儿初始激素治疗敏感，但有80％
‑
90％的患儿复发，其中25％
‑
43％患儿发展成为难治性肾病，其发病隐匿、临床表现多样、糖皮质激素治疗效果不佳,且预后较差。依据激素治疗敏感反应，可以将PNS分成若干疾病类型，其中激素敏感无复发型肾病和激素依赖/频复发型肾病是最具有临床特征的两种类型。激素敏感无复发型NS定义为泼尼松足量2mg/(kg.d)或60mg/(m2.d)治疗≤4周尿蛋白转阴者，且治疗初期治疗2年内无复发；激素依赖/频复发型肾病定义为对激素敏感，但连续两次减量或停药2周内复发者或者指病程中半年内复发≥2次，或1年内复发≥4次。以上两种肾病治疗难度和类型差异大，因此，建立一款检测PNS这两种激素敏感性风险基因位点的临床试剂盒成为医疗行业共同关注的问题。该试剂盒在临床病人的应用开展，可有助于对病人进行治疗或是跟踪随访，可有效减少过度治疗提高生活质量，有利于临床医生早期识别、早期干预，有利于疾病诊治及药物选择，具有一定的社会意义及经济效益。

技术实现思路

[0003]针对上述现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒及方法，以解决现有技术中对PNS分型难以检测，而导致难以对PNS病人进行早期识别、干预和治疗的问题。
[0004]为了解决上述问题，本专利技术采用了如下的技术方案：
[0005]早期协助临床医生判断PNS是否进展为激素敏感无复发型肾病或激素依赖/频复发型肾病，试剂盒包含的人类白细胞抗原(HLA)等位基因及单核苷酸多态性(SNP)位点如下：
[0006]HLA
‑
DQB1*06:02、HLA
‑
A*11:01、HLA
‑
B*15:02、HLA
‑
A*02:01、chr2:171713702、rs1049123、rs9273471、rs774409792等位基因及位点。
[0007]第一方面，本专利技术提供一种用于检测原发肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的引物组，包括：
[0008]HLA
‑
DQB1*06:02
‑
F：5
′‑
CCCAGGAAATGCTTCTCCACAG
‑3′
，
[0009]HLA
‑
DQB1*06:02
‑
R：5
′‑
GGATTGGATGGTCCCTCGGAA
‑3′
；
[0010]HLA
‑
A*11:01
‑
F：5
′‑
CACTCAGGCACAACTTTTCCGGA
‑3′
，
[0011]HLA
‑
A*11:01
‑
R：5
′‑
GCGACGACACTGATTGGCTT
‑3′
；
[0012]HLA
‑
B*15:02
‑
F：5
′‑
CTCCCTGGTTTCCACAGACAGA
‑3′
，
[0013]HLA
‑
B*15:02
‑
R：5
′‑
TTGTAGATCTGTGTGTTCCGGTCC
‑3′
；
[0014]HLA
‑
A*02:01
‑
F：5
′‑
CTTACTCTCTGGCACCAAACTCCA
‑3′
，
[0015]HLA
‑
A*02:01
‑
R：5
′‑
AGAGTAGCAGGAGGAGGGTTC
‑3′
；
[0016]chr2:171713702
‑
F：5
′‑
GACTGGAGTGCCTTTGAAAGAGG
‑3′
，
[0017]chr2:171713702
‑
R：5
′‑
CATGCCCAGCCTGAAAAACAC
‑3′
；
[0018]rs1049123
‑
F：5
′‑
TTCACCTTTGCACAGATCTTGGGG
‑3′
，
[0019]rs1049123
‑
R：5
′‑
TACACAGCACTCACCAAACCAGAA
‑3′
；
[0020]rs9273471
‑
F：5
′‑
CTTGTGAAATGTGGAGCCAGAACC
‑3′
，
[0021]rs9273471
‑
R：5
′‑
AAGAATAGAAACAGAAACCCCTTGGG
‑3′
；
[0022]rs774409792
‑
F:5
′‑
AGTGGGGATGCTACCACACT
‑3′
,
[0023]rs774409792
‑
R:5
′‑
AGCAAAGTCAGTCTGCAGCCA
‑3′
。
[0024]第二方面，本专利技术提供一种用于检测原发肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒，包含所述用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的引物组。
[0025]进一步，所述试剂盒还包括PCR预混液和双蒸水。
[0026]第三方面，本专利技术提供一种用于检测原发肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的体系，包括：
[0027]2μl检测HLA
‑
DQB1*06:02、HLA
‑
A*11:01、HLA
‑
B*15:02和HLA
‑
A*02:01基因的引物组、25μlPCR聚合酶和22μlddH2O，和1μlPCR聚合酶和检测chr2:171713702、rs1049123、rs9273471和rs774409792位点的引物组各1μl。
[0028]第四方面，本专利技术提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的引物组，其特征在于，包括：HLA
‑
DQB1*06:02
‑
F：5
′‑
CCCAGGAAATGCTTCTCCACAG
‑3′
，HLA
‑
DQB1*06:02
‑
R：5
′‑
GGATTGGATGGTCCCTCGGAA
‑3′
；HLA
‑
A*11:01
‑
F：5
′‑
CACTCAGGCACAACTTTTCCGGA
‑3′
，HLA
‑
A*11:01
‑
R：5
′‑
GCGACGACACTGATTGGCTT
‑3′
；HLA
‑
B*15:02
‑
F：5
′‑
CTCCCTGGTTTCCACAGACAGA
‑3′
，HLA
‑
B*15:02
‑
R：5
′‑
TTGTAGATCTGTGTGTTCCGGTCC
‑3′
；HLA
‑
A*02:01
‑
F：5
′‑
CTTACTCTCTGGCACCAAACTCCA
‑3′
，HLA
‑
A*02:01
‑
R：5
′‑
AGAGTAGCAGGAGGAGGGTTC
‑3′
；chr2:171713702
‑
F：5
′‑
GACTGGAGTGCCTTTGAAAGAGG
‑3′
，chr2:171713702
‑
R：5
′‑
CATGCCCAGCCTGAAAAACAC
‑3′
；rs1049123
‑
F：5
′‑
TTCACCTTTGCACAGATCTTGGGG
‑3′
，rs1049123
‑
R：5
′‑
TACACAGCACTCACCAAACCAGAA
‑3′
；rs9273471
‑
F：5
′‑
CTTGTGAAATGTGGAGCCAGAACC
‑3′
，rs9273471
‑
R：5
′‑
AAGAATAGAAACAGAAACCCCTTGGG
‑3′
；rs774409792
‑
F:5
′‑
AGTGGGGATGCTACCACACT
‑3′
,rs774409792
‑
R:5
′‑
AGCAAAGTCAGTCTGCAGCCA
‑3′
。2.一种用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的引物组。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括PCR预混液和双蒸水。4.一种用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的体系，其特征在于，包括：2μl的权利要求1中的检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：阳海平，陈汉，李秋，杨雪影，杨霞，王墨，张高福，吴道奇，陈学兰，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：