治疗性SIRPα抗体制造技术

提供了具有不同功能特征的抗SIRPα单克隆抗体(抗SIRPα mAb)，包括多特异性SIRPα抗体，以及相关组合物和使用抗SIRPα mAb作为治疗剂用于预防和治疗实体癌和血液癌的方法。还提供了示例性抗SIRPα单克隆抗体的氨基酸序列。列。列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗性SIRP
α
抗体


[0001]本公开涉及免疫疗法领域。本公开提供抗SIRPα抗体(抗SIRPα)，所述抗SIRPα抗体破坏SIRPα和CD47之间的相互作用，增强肿瘤细胞的吞噬作用，引起免疫反应的免疫调节，以及产生抗SIRPα抗体的方法和使用抗SIRPα抗体作为用于预防和治疗血液癌症和实体癌症的治疗剂。

技术介绍

[0002]靶向适应性免疫(包括T细胞检查点、PD
‑
1、PD
‑
L1和CTLA
‑
4)的治疗性抗体可增强T细胞免疫反应的细胞毒活性，提高了患有转移性疾病的患者的长期缓解甚或治愈的前景(Hodi 2010，McDermott 2015)。尽管取得了积极成果，但仍有对这些检查点抑制剂没有反应(原发性耐药)的大量患者，或对这些检查点抑制剂有反应但最终发展为疾病进展(获得性耐药)的患者(Pitt 2016，Restifo 2016，Sharma 2017)。最近的研究表明，耐药机制既可以是肿瘤细胞内在的，包括缺乏独特的肿瘤抗原蛋白或抑制肿瘤抗原呈递；也可以是肿瘤细胞外在的，包括浸润性T细胞、多余的抑制检查点的缺失、和/或存在肿瘤微环境中的免疫抑制细胞(Sharma 2017)。即使对于被认为对检查点抑制剂敏感的肿瘤，或当联合使用抗CTLA
‑
4和抗PD
‑
1/PDL
‑
1药物时，大约50％的患者不会出现肿瘤缩小，并且所有接受治疗的患者的平均治疗持续时间或无进展生存期仍然相对较短约2<br/>‑
5个月的(Kazandjian，2016)。此外，一些最普遍的实体瘤和大多数血液恶性肿瘤使用这些检查点抑制剂显示出令人失望的结果。特别是，激素受体阳性乳腺癌、结直肠癌(非微卫星不稳定性)和前列腺癌似乎对这种类型的免疫操作不敏感，并且可能受益于不同的免疫治疗方法(Le2015，Dirix2015，Topalian2012，Graft2016)。这些发现强调需要替代或协同方法，这些方法靶向额外的检查点来活化先天免疫反应以及适应性免疫反应，以进一步改善临床结果。先天免疫反应的几个检查点存在于肿瘤细胞和骨髓细胞(巨噬细胞、树突细胞、单核细胞衍生的抑制细胞、粒细胞)上，所述检查点是影响肿瘤进展、转移和总体结果的肿瘤微环境的重要细胞成分(Barclay和van den Berg 2014，Yanagita 2017)。
[0003]信号调节蛋白α(SIgnal Regulatory Protein(SIRP)
‑
α)或SIRPα，也称为CD172a、BIT或SHPS
‑
1，是与SIRP蛋白的密切相关的SIRP配对受体家族的成员。SIRPα主要由造血细胞(hematopoietic cell)(包括巨噬细胞、树突细胞和粒细胞)表达，还在尤其是大脑、神经胶质细胞、平滑肌细胞和内皮细胞以及一些肿瘤细胞(Barclay和van den Berg 2014)的神经元上表达。SIPRα是一种跨膜蛋白，其具有包含三个Ig样结构域的胞外结构域和包含基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(immunoreceptor tyrosine
‑
based inhibitory motif，ITIM)的胞质区域。
[0004]编码人SIRPα的基因是多态性的，已报道最多达10种SIRPα单倍型(haplotype)[TakenakaK.等人，2007年和Brooke G.等人，2004年]。三个等位基因组(纯合子v1/v1、杂合子v1/v2和纯合子v2/v2)几乎涵盖了所有已进行基因分型的族群(Treffers LW等人，2018年和Sim J.等人，2020年)。针对SIRPα的泛等位基因特异性抗体将最广泛地靶向/阻断不同
人群中的SIRPα/CD47检查点，因为在SIRPα的两个等位基因的杂合子阻断中，以增强巨噬细胞介导的吞噬作用(Sim J.等人，2020和Zhao XW等人，2011)。本公开的抗SIRPα mAb或其抗原结合片段结合人单核细胞系U937(SIRPα v1/v1)和THP
‑
1(SIRPα v2/v2)(Tsai等人，2010)，不像mAb 18D5仅结合到U937(SIRPα v1/v1)(基于细胞的结合测定)(Tsai等人，2010年和van Eenennaam等人，2018年)。
[0005]由骨髓细胞表达的SIRPα与在许多肿瘤细胞以及一些正常细胞上表达或过表达的CD47的相互作用是调节骨髓功能(包括粘附、迁移、活化和抑制活性)的先天反应的重要免疫检查点。CD47/SIRPα相互作用调节靶细胞的巨噬细胞和树突细胞吞噬作用，所述靶细胞向吞噬细胞发送抑制性“不要吞噬我信号”。CD47与SIRPα的结合启动抑制性信号级联反应，从而在其细胞质ITIM磷酸化后抑制吞噬作用(Oldenborg 2000，Oldenborg 2001，Okazawa 2005)，SHP
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1和SHP
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2的募集和结合，包含Src同源结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶(Veillette 1998，Oldenborg 2001)，抑制非肌肉肌球蛋白IIA和最终的吞噬功能(Tsai和Discher2008，Barclay和van den Berg 2014，Murata2014，Veillette和Chen2018，Matazaki2009)。作为“不要吞噬我”信号的CD47作用的一个重要推论是其作为“自我标记”的作用。这提供了对自身吞噬作用的显著阻碍，并阻断了随后的自身免疫反应(Oldenborg，2002，Oldenborg 2004)。癌细胞使用CD47以“自我”掩饰，从而避开先天免疫系统和适应性免疫系统。阻断先天免疫细胞(如巨噬细胞和树突细胞)上的SIRPα和肿瘤细胞上的CD47的相互作用已成为癌症治疗中的可行目标。临床前数据表明，与抗CD47抗体类似，阻断SIRPα的抗体/CD47相互作用的抗SIRPα抗体在小鼠肿瘤模型中表现出抗肿瘤功效，无论是作为单一疗法还是与其他药物联合使用(Gauttier，2017；Ring，2017；Yanigita,2017；Poirier，2018；和Guattier，2018)。重要的是，除SIRPα/CD47相互作用中断后的先天免疫反应外，适应性免疫反应的产生似乎对于获得稳健的抗肿瘤反应至关重要(Tseng 2013，Li 2015，Xu 2017)。
[0006]DC细胞上SIRPα的表达及其与T细胞上CD47的相互作用似乎对诱导适应性免疫反应是重要的。据报道，阻断SIRPα/CD47相互作用影响DC刺激抗原特异性CD8+T细胞反应的能力，这与增强的DC介导的对肿瘤DNA的反应相关(Liu 2015，Xu 2017)。
[0007]SIRP配对受体家族的另一个成员SIRP
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γ在人(而不是啮齿动物)T细胞表面上选择性表达，具有由4个氨基酸组成的短细胞质区本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用特异性结合人SIRPα的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段诱导癌细胞的吞噬作用而不诱导正常外周血单核细胞(PBMC)的吞噬作用，其中所述单克隆抗体或抗原结合片段包含治疗癌症的有效量的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2、LCDR3)和三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，其中所述三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2、LCDR3)选自：i.SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3；ii.SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6；iii.SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9；iv.SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12；v.SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15；vi.SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18；vii.SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21；viii.SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24；ix.SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27；x.SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30；xi.SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：12；xii.SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32；xiii.SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27；并且所述三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2、HCDR3)选自：xiv.SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：35；xv.SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：38；xvi.SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40和SEQ ID NO：41；xvii.SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43和SEQ ID NO：44；xviii.SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46和SEQ ID NO：47；xix.SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：50；xx.SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52和SEQ ID NO：53；xxi.SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：56；xxii.SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：59；xxiii.SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61和SEQ ID NO：62；和xxiv.SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：63。2.根据权利要求18所述的方法，其中特异性结合人SIRPα的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域(V
H
)和轻链可变结构域(V
L
)选自：i.包含氨基酸序列SEQ ID NO：81的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：64的轻链可变结构域；ii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：82的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：65的轻链可变结构域；iii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：83的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：66的轻链可变结构域；
NO：77的轻链可变结构域；xxiv.包含氨基酸序列SEQ ID NO：95的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：78的轻链可变结构域；xxv.包含氨基酸序列SEQ ID NO：95的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：79的轻链可变结构域；xxvi.包含氨基酸序列SEQ ID NO：95的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：80的轻链可变结构域；xxvii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：96的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：78的轻链可变结构域；xxviii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：96的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：79的轻链可变结构域；xxix.包含氨基酸序列SEQ ID NO：96的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：80的轻链可变结构域；xxx.包含氨基酸序列SEQ ID NO：97的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：78的轻链可变结构域；xxxi.包含氨基酸序列SEQ ID NO：97的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：79的轻链可变结构域；xxxii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：97的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：80的轻链可变结构域；和xxxiii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：89的重链可变结构域和包含氨基酸序列SEQ ID NO：72的轻链可变结构域。3.根据权利要求18所述的方法，其中特异性结合人SIRPα的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含选自以下的一条重链和一条轻链：i.包含氨基酸序列SEQ ID NO：109的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：98的轻链；ii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：110的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：99的轻链；iii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：111的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：100的轻链；iv.包含氨基酸序列SEQ ID NO：112的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：101的轻链；v.包含氨基酸序列SEQ ID NO：112的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：102的轻链；vi.包含氨基酸序列SEQ ID NO：112的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：103的轻链；vii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：113的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：101的轻链；viii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：113的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：102的轻链；ix.包含氨基酸序列SEQ ID NO：113的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：103的轻链；x.包含氨基酸序列SEQ ID NO：114的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：101的轻链；xi.包含氨基酸序列SEQ ID NO：114的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：102的轻链；xii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：114的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：103的轻链；xiii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：115的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：101的轻链；xiv.包含氨基酸序列SEQ ID NO：115的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：102的轻链；
xv.包含氨基酸序列SEQ ID NO：115的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：103的轻链；xvi.包含氨基酸序列SEQ ID NO：116的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：104的轻链；xvii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：117的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：105的轻链；xviii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：117的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：106的轻链；xix.包含氨基酸序列SEQ ID NO：117的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：107的轻链；xx.包含氨基酸序列SEQ ID NO：118的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：105的轻链；xxi.包含氨基酸序列SEQ ID NO：118的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：106的轻链；xxii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：118的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：107的轻链；xxiii.包含氨基酸序列SEQ ID NO：119的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：105的轻链；xxiv.包含氨基酸序列SEQ ID NO：119的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：106的轻链；xxv.包含氨基酸序列SEQ ID NO：119的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：107的轻链；和xxvi.包含氨基酸序列SEQ ID NO：120的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：108的轻链。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含IgG同种型，所述IgG同种型选自IgG1、IgG1
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N297Q、IgG2、IgG4、IgG4 S228P、IgG4 PE及它们的变体。5.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段结合人SIRPα和人SIRPγ。6.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中吞噬作用的所述诱导是Fc依赖性的。7.根据权利要求6所述的方法，其中吞噬作用的所述诱导依赖于FcγR。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述FcγR选自FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)、FcγRIIB(CD32)、FcγRIIIA(CD16a)和FcγRIIIB(CD16b)。9.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段与化疗剂或治疗性抗体联合施用。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述治疗性抗体针对选自以下的细胞靶标：CD47(分化簇47)、CD70(分化簇70)、CD200(OX
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2膜糖蛋白，分化簇200)、CD154(分化簇154，CD40L，CD40配体，分化簇40配体)、CD223(淋巴细胞激活基因3，LAG3，分化簇223)、KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)、GITR(TNFRSF18，糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白，激活诱导的TNFR家族受体，AITR，肿瘤坏死因子受体超家族成员18)、CD20(分化簇20)、CD28(分化簇28)、CD40(分化簇40，Bp50，CDW40，TNFRSF5，肿瘤坏死因子受体超家族成员5，p50)、CD86(B7
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2，分化簇86)、CD160(分化簇160，BY55，NK1，NK28...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：安驰肿瘤公司，
类型：发明
国别省市：