本发明专利技术涉及奶粉中母乳寡糖(Human Milk Oligosaccharides，HMOs)乳糖
【技术实现步骤摘要】
一种测定乳糖
‑
N
‑
新四糖及其美拉德反应产物的检测方法
[0001]本专利技术涉及分析化学
，尤其涉及一种利用离子色谱测定婴幼儿配方奶粉中乳糖
‑
N
‑
新四糖的检测方法。
技术介绍
[0002]母乳寡糖(Human Milk Oligosaccharides，HMOs)是成熟母乳中含量第三多的固体成分，作为婴儿的重要益生元，其中，乳糖
‑
N
‑
新四糖通过选择性刺激双歧杆菌等有益微生物，来塑造肠道微生物群。在婴儿配方奶粉150多年的发展历程中，其功能逐渐从基础营养发展到功能营养，成分和结构也越来越接近真正的母乳。2016年3月11日，欧盟批准乳糖
‑
N
‑
新四糖作为新食品成分使用，我国也于2022年10月公开征求乳糖
‑
N
‑
新四糖作为食品营养强化剂添加的意见，一种基于婴幼儿配方奶粉的、灵敏度高、抗干扰能力强的检测乳糖
‑
N
‑
新四糖(LNnT)及其美拉德反应产物含量的检测方法亟待开发。
技术实现思路
[0003]现有技术暂无应用于在婴幼儿配方奶粉基质中检测乳糖
‑
N
‑
新四糖及其美拉德反应产物含量的灵敏度高、抗干扰效果好的检测方法。
[0004]专利技术利用离子色谱检测婴幼儿配方奶粉中乳糖
‑
N
‑
新四糖及其美拉德反应产物的含量，即实现了在婴幼儿配方奶粉的复杂基质中检测乳糖
‑
N
‑
新四糖及其美拉德反应产物的含量，能够用于准确检验营养强化的婴幼儿配方奶粉中乳糖
‑
N
‑
新四糖的添加量是否达到或超出相应标准。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的具体的技术方案为：一种利用离子色谱测定婴幼儿配方奶粉中乳糖
‑
N
‑
新四糖及其美拉德反应产物的检测方法，所述方法包括以下步骤：
[0006](1)配制标准储备液：称取LNnT、LNnT衍生物的标准品，加水定容得到标准储备液，备用；
[0007](2)配制标准工作液：移取标准储备液配置成不同浓度的标准工作液；
[0008](3)利用离子色谱测定标准工作液中的LNnT、LNnT衍生物的含量并得到标准曲线，其中，离子色谱的色谱条件为：CarboPacTM PA1离子色谱柱(4mm
×
250mm)，CarboPacTM PA1保护柱(4mm
×
50mm)；柱温25℃；检测器温度25℃；流速1mL/min；进样量10μL；淋洗液为0min 40％ A相+60％ B相，10
‑
22min 100％ B相；其中，A相：超纯水；B相：90mmol/L氢氧化钠溶液。。
[0009](4)对婴幼儿配方奶粉进行复溶、除蛋白、除脂肪、寡糖浓缩纯化的前处理，其中，处理方法为：婴幼儿配方奶粉与超纯水1:7.3混合复溶，4℃下12000r/min离心30min，弃去上层脂肪和下层蛋白，取中间层溶液与两倍体积无水乙醇混合，4℃下静置过夜后10000r/min离心15min，取上清液利用石墨化碳固相萃取柱纯化，并通过SPE离子色谱预处理柱得到上样样品。
[0010](5)按照步骤(4)的方法处理待测样品，按照步骤(3)的方法得到待测样品中LNnT
的出峰面积，并代入步骤(3)得到的标准曲线中计算得到待测样品中LNnT的浓度。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中，标准储备液放置于4℃密封保存。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)中标准储备液的浓度优选为300mg/L。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(2)中，所述混合标准工作液的浓度为3～80mg/L的梯度浓度，优选为3mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)所述的标准曲线以LNnT的浓度为横坐标，出峰面积为纵坐标。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(4)所述的石墨化碳固相萃取柱的活化方式为：3mL乙腈、3mL超纯水。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(4)所述的石墨化碳固相萃取柱的清洗方式为：10mL超纯水。
[0017]本专利技术取得的有益效果：
[0018](1)本专利技术利用离子色谱检测婴幼儿配方奶粉中乳糖
‑
N
‑
新四糖及其美拉德反应产物含量的方法，能够用于准确检验食品营养强化剂添加量是否合格或超标；
[0019](2)本专利技术中LNnT仪器检出限为2.6mg/L、定量限为15.4mg/L。本专利技术对LNnT的回收率在95％
‑
105％之间，具有良好的重现性。
附图说明
[0020]图1为乳糖
‑
N
‑
新四糖(LNnT)的色谱图。
具体实施方式
[0021]下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。
[0022]实施例1
[0023](1)标准储备液配制：准确称取30mg LNnT的标准品，加水定容至100mL，放置于4℃密封保存；
[0024](2)标准工作液的配置：准确移取标准储备液配置成浓度分别为3mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L标准工作液；
[0025](3)色谱条件为：
[0026]保护柱：CarboPacTM PA1(4mm
×
50mm)
[0027]分析柱：CarboPacTM PA1(4mm
×
250mm)，
[0028]进样量10μL
[0029]流动相为：A相超纯水；B相90mmol/L NaOH，洗脱程序见表1；
[0030]表1梯度洗脱程序
[0031][0032](4)标准曲线的绘制：以LNnT的浓度为横坐标，出峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到线性方程，本专利技术中LNnT出峰时间为18.8min，检出限为2.6mg/L、定量限为15.4mg/L，相关系数(R2)为0.9997，本方法灵敏度较高，准确性好，具有较强的可靠性。
[0033](5)婴幼儿配方奶粉前处理：婴幼儿配方奶粉与超纯水1:7.3混合复溶，4℃下12000r/min离心30min，取中间层溶液与两倍体积无水乙醇混合，4℃下静置过夜后10000r/min离心15min，取上清液利用石墨化碳固相萃取柱纯化，3mL乙腈、3mL超纯水活化石墨化碳固相萃取柱，10mL超纯水清洗，并通过SPE离子色谱预处理柱得到上样样品。
[0034](本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用离子色谱测定婴幼儿配方奶粉中乳糖
‑
N
‑
新四糖(LNnT)的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)配制标准储备液：称取乳糖
‑
N
‑
新四糖的标准品，加超纯水定容得到标准储备液，备用；(2)利用瑞士万通940离子色谱仪测定标准品中乳糖
‑
N
‑
新四糖的含量，并得到标准曲线；(3)对待测奶粉进行复溶、除蛋白、除脂肪、寡糖浓缩纯化等处理(4)按照步骤(2)的方法检测待测样品中乳糖
‑
N
‑
新四糖的出峰面积，并代入步骤(2)得到的标准曲线中计算得到待测样品中乳糖
‑
N
‑
新四糖的浓度；其中，离子色谱的色谱条件为：CarboPac
TM
PA1离子色谱柱(4mm
×
250mm)，CarboPac
TM
PA1保护柱(4mm
×
50mm)；柱温25℃；检测器温度25℃；流速1mL/min；进样量10μL；淋洗液为0min40％A相+60％B相，10
‑
22min100％B相；其中，A相：超纯水；B相：90mmol/L氢氧化钠溶液。2.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：张昊，刘美希，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。