一种负载RNA的脑内递送系统及其制备方法技术方案

本发明专利技术属于药物递送体系技术领域，具体涉及一种负载RNA的脑内递送系统及其制备方法。该负载RNA的脑内递送系统包括mDps蛋白纳米笼、ApoE短肽、mDps蛋白纳米笼和RNA；其中，ApoE短肽通过静电相互作用吸附RNA，形成ApoE短肽负载RNA体系，RNA是长度在20

【技术实现步骤摘要】
一种负载RNA的脑内递送系统及其制备方法


[0001]本专利技术属于药物递送体系
，具体涉及一种负载RNA的脑内递送系统及其制备方法。

技术介绍

[0002]载脂蛋白E(apolipoproteinE，ApoE)是一种多态性蛋白，是参与脂蛋白的转化与代谢过程，其基因可以调节许多生物学功能，载脂蛋白E的N端含有低密度脂蛋白受体结合域，因此载脂蛋白E可以与脑血管内皮细胞上的低密度脂蛋白受体结合，通过转饱吞机制，将大分子量物质递送到脑内，实现跨血脑屏障的递送。现有研究发现，由载脂蛋白E衍生出的ApoE短肽依然可以介导大分子物质实现跨血脑屏障的递送。因此，ApoE短肽在介导纳米颗粒实现跨血脑的药物递送领域被广泛应用。
[0003]然而，研究人员只关注到ApoE短肽可介导纳米载体跨血脑屏障的能力，却忽略了ApoE短肽作为一个带正电荷的氨基酸序列，其可以高效吸附RNA。截止目前，没有报道利用ApoE短肽负载RNA药物实现跨血脑递送的纳米载体构建方法。
[0004]RNA治疗由于其靶点特异性高和毒性低而被广泛用于脑内疾病的治疗，但是RN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种负载RNA的脑内递送系统，其特征在于，包括mDps蛋白纳米笼、ApoE短肽、mDps蛋白纳米笼和RNA；其中，所述ApoE短肽通过静电相互作用吸附RNA，形成ApoE短肽负载RNA体系，所述RNA是长度在20
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23个碱基的单链或者双链RNA序列；所述mDps蛋白纳米笼表面通过马来酰亚胺和巯基的反应共价连接有若干ApoE短肽负载RNA体系，并且所述mDps蛋白纳米笼表面通过叠氮和环炔的点击化学反应连接有若干未负载RNA的ApoE短肽，所述ApoE短肽负载RNA体系与所述未负载RNA的ApoE短肽均分布于所述mDps蛋白纳米笼表面；所述ApoE短肽的氨基酸序列为LRKLRKRLLLRKLRKRLLK；所述mDps蛋白纳米笼为野生型Dps经过氨基酸突变制备所得，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的一种负载RNA的脑内递送系统的制备方法，其特征在于，包括：(1)mDps蛋白纳米笼的制备：获取野生型Dps的基因序列，其基因序列如SEQ ID NO.2，在该序列对应的氨基酸的N端添加6个组氨酸标签，同时将该序列对应的氨基酸的152位的色氨酸替换为半胱氨酸，得到mDps蛋白纳米笼；(2)制备ApoE短肽负载RNA体系：通过静电相互作用将带负电的RNA吸附到马来酰亚胺活化的ApoE短肽上；(3)mDps蛋白纳米笼联合ApoE肽负载RNA纳米体系：通过共价连接的方式将负载RNA的带有马来酰亚胺活化基团的ApoE短肽修饰到mDps蛋白纳米笼152位的半胱氨酸上，mDps蛋白纳米笼表面再通过叠氮和环炔的点击化学反应修饰连接有未负载RNA末端带叠氮基团的ApoE短肽。3.根据权利要求2所述的一种负载RNA的脑内递送系统的制备方法，其特征在于，mDps蛋白纳米笼的制备步骤如下：S1、获取野生型Dps的氨基酸序列，在蛋白N端添加6个组氨酸标签，同时将152位的色氨酸替换为半胱氨酸，得到突变体Dps，野生型Dps的基因序列如SEQ ID NO.2所示；S2、对大肠杆菌密码子进行优化，促进突变体Dps的基因序列在大肠杆菌中表达，将优化后的突变体mDps的基因序列连接到PET28a载体上，得到Stab
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Top10
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PET28a
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mDps穿刺菌；S3、抽提大肠杆菌穿刺菌Stab
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PET28a
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mDps质粒后进行测序，将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌的表达菌株Rosetta中，构建mDps表达菌，加入诱导剂IPTG诱导表达；S4、收集mDps表达菌的菌体，重悬于20mMPB+100...

【专利技术属性】
技术研发人员：董轲，张娟，崔博宙，郜赵伟，张惠中，和婷，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：