禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒及其制备方法和应用技术

禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒及其制备方法和应用，属于病毒多价新型疫苗研发领域，该嵌合病毒样颗粒以新城疫病毒NA

【技术实现步骤摘要】
禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于病毒多价新型疫苗研发
，具体涉及一种禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]I群禽腺病毒(Fowl adenovirus，FAV
‑
I)对各日龄、各种禽类均易感，导致其生产性能下降和不同程度地死亡，给养禽业带来了巨大的经济损失。根据群特异性抗原可将FAV
‑
I分为A、B、C、D和E共5个种、12个血清型。C(血清4型)禽腺病毒处于优势流行地位，主要引起心包积水综合征；E(血清8a型和8b型)禽腺病毒病毒株分离率日益增加，主要引起包涵体肝；同时D(血清11型)禽腺病毒病毒株分离也时有报导。伴随更多血清型出现，禽腺病毒病总体以新发动物传染病的形式流行。
[0003]经批准的鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群血清4型禽腺病毒)三联灭活疫苗(LaSota株+YBF13株+YBAV
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4株)为我国第一个禽腺病毒病疫苗，但单基因型灭活疫苗无法满足当前的多基因型禽腺病毒病的防本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒，其特征在于，以新城疫病毒NA
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1株的基质蛋白M为骨架，将Ⅰ群血清4型禽腺病毒的Fiber
‑
2蛋白、Ⅰ群血清8a型禽腺病毒的Fiber蛋白、Ⅰ群血清8b型禽腺病毒的Fiber蛋白、Ⅰ群血清11型禽腺病毒的Fiber蛋白分别嵌合于新城疫病毒样颗粒载体NDVVLPs表面，得到该禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒，命名为FAdV4
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8a
‑
8b
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11cVLPs。2.根据权利要求1所述的禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒，其特征在于，所述Ⅰ群血清4型禽腺病毒的Fiber
‑
2蛋白采用胞外域替换策略嵌合于新城疫病毒样颗粒载体NDVVLPs表面，即将新城疫病毒样颗粒载体NDVVLPs的F蛋白胞外域替换成Ⅰ群血清4型禽腺病毒的Fiber
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2蛋白胞外域，通过overlap PCR将两者连接；所述Ⅰ群血清8a型禽腺病毒的Fiber蛋白、Ⅰ群血清8b型禽腺病毒的Fiber蛋白、Ⅰ群血清11型禽腺病毒的Fiber蛋白均采用GPI锚定策略嵌合于新城疫病毒样颗粒载体NDVVLPs表面。3.如权利要求1
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2中任意一项所述的禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、目的基因的优化及合成；步骤二、重组穿梭质粒的构建；步骤三、重组杆粒的构建；步骤四、重组杆状病毒的拯救；步骤五、禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒的制备及纯化。4.根据权利要求3所述的禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤一的具体操作步骤如下：分别对基因
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型新城疫病毒M基因序列、Ⅰ群血清4型禽腺病毒HB 1510株Fiber
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2基因序列、Ⅰ群血清8a型禽腺病毒TR
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59株Fiber基因序列、Ⅰ群血清8b型禽腺病毒764株Fiber基因序列、Ⅰ群血清11型禽腺病毒380株Fiber基因序列进行优化，优化后的M基因序列、F4基因序列、F8a基因序列、F8b基因序列、F11基因序列分别见SEQ ID NO.1
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SEQ ID NO.5。5.根据权利要求4所述的禽腺病毒病四价嵌合病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤二的具体操作步骤如下：根据优化后的M基因序列、F4基因序列、F8a基因序列、F8b基因序列、F11基因序列和pFastbac
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1载体信息、pFastbac
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GPI载体信息设计目的基因特异性引物和M13通用鉴定引物，利用PCR进行基因扩增，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定正确，再将合成的各个质粒分别进行双酶切，使用DNA胶回收试剂盒回收目的片段，将回收的M基因和F4基因连接至pFastbac1载体，将回收的F8a基因、F8b基因、F11基因分别连接至pFastbac1
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GPI载体，转化至DMT感受态细胞中进行PCR及双酶切筛选，获得重组穿梭质粒pFastbacl
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M、pFastbac1
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【专利技术属性】
技术研发人员：丁壮，郭春红，李金斗，丁佳欣，陈铭桦，邹映雪，陈凯楠，付永恒，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：