一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法和应用技术

本发明专利技术适用于动物模型技术领域，提供了一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法，包括：将小鼠麻醉后，取出小鼠一侧的睾丸及附睾；将包含固绿染液的亚砷酸钠溶液经睾丸网入口注射进入小鼠睾丸中，亚砷酸钠溶液浓度为30

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法和应用


[0001]本专利技术属于动物模型
，尤其涉及一种体内应激颗粒动物模型的构建方法和应用。

技术介绍

[0002]RNA结合蛋白SERBP1预测能够结合SUMO结构域、mRNA 3'
‑
UTR和核糖体，预测参与PML小体的组织和凋亡过程的调控，预测能够定位于胞质溶胶和质膜中，预测在细胞质和细胞核中活性增强，预测SERBP1能够在特殊的环境下，比如高压，缺氧，酸碱，毒素等，产生应激颗粒，与应激颗粒蛋白TIAR和G3BP1共定位。
[0003]目前有关SERBP1的研究甚少，尤其在睾丸组织的应激颗粒产生方面研究更为缺乏，其产生机制不清楚，因此，建立小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型，并在此基础上探究SERBP1蛋白在小鼠睾丸组织应激颗粒中发挥的作用、相关机制及可能参与的分子通路具有重要意义，同时为指导特殊状态下细胞应激颗粒的产生和恢复提供新的理论依据。

技术实现思路

[0004]本专利技术实施例的目的在于提供一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法，旨在解决上述
技术介绍
中存在的问题。
[0005]本专利技术实施例是这样实现的，一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法，包括以下步骤：将小鼠麻醉后，取出小鼠一侧的睾丸及附睾；将包含固绿染液的亚砷酸钠溶液经睾丸网入口注射进入小鼠睾丸中，所述亚砷酸钠溶液浓度为30
‑
50mM；缝合小鼠伤口，待小鼠恢复状态，等待3h后处死小鼠，分离睾丸组织后切片，进行免疫荧光实验，当有明显的应激颗粒形成，则表示模型构建成功。
[0006]优选地，将小鼠麻醉的步骤中，腹腔注射50mg 1%浓度的戊巴比妥/1Kg小鼠体重。
[0007]优选地，取出小鼠一侧的睾丸及附睾的步骤，具体包括：小鼠手术区域为耻骨联合上方1 cm处进行横行切口，拉出一侧小鼠的睾丸及附睾，将睾丸及附睾放置于纱布上，转移至体式显微镜下。
[0008]优选地，将包含固绿染液的亚砷酸钠溶液经睾丸网入口注射进入小鼠睾丸中的步骤中，所述固绿染液浓度为0.5%，由0.01M的磷酸盐缓冲溶液配置而成；所述注射的角度为25
‑
35
°
；所述注射的液体量为1ul亚砷酸钠/3g小鼠体重。
[0009]优选地，等待3h后处死小鼠的步骤中，采用颈部脱臼法处死小鼠。
[0010]优选地，当睾丸组织切片有明显的应激颗粒形成，出现DZAL绿色荧光蛋白与应激颗粒蛋白标志物TIAR共定位，为阳性精母细胞应激颗粒模型组；当睾丸组织切片有明显的应激颗粒形成，出现SERBP1红色荧光蛋白与应激颗粒蛋
白标志物G3BP1共定位，为阳性SERBP1应激颗粒模型组。
[0011]本专利技术实施例的另一目的在于提供一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法在识别精母细胞产生应激颗粒上的应用。
[0012]本专利技术实施例的又一目的在于提供一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法在识别RNA结合蛋白SERBP1的产生上的应用。
[0013]本专利技术实施例提供的一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法，基于显微镜注射技术注射合适浓度的亚砷酸钠溶液，并成功构建一种体内应激颗粒动物模型，经验证小鼠的单侧睾丸注射10微升30
‑
50mM浓度的亚砷酸钠，可以引起小鼠睾丸组织的明显应激；通过分子生物学、免疫荧光等技术手段研究SERBP1蛋白在小鼠睾丸组织应激颗粒中发挥的作用、相关机制及可能参与的分子通路，为指导亚砷酸钠诱导的应激是如何影响睾丸生精细胞的发育提供新的理论依据。
附图说明
[0014]图1为本专利技术实施例提供的构建和分析一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的方法模式图；图2为本专利技术实施例提供的小鼠睾丸注射亚砷酸钠的效果图；图3为本专利技术实施例提供的小鼠手术后3h的睾丸大小比较图；图4为本专利技术实施例提供的DZAL绿色荧光蛋白与应激颗粒蛋白标志物TIAR共定位图；图5为本专利技术实施例提供的SERBP1红色荧光蛋白与应激颗粒蛋白标志物G3BP1共定位图。
实施方式
[0015]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0016]一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法，具体包括以下步骤：（1）实验前准备好C57成年雄鼠和1%戊巴比妥麻醉剂，解剖前5分钟，根据小鼠的体重，每1千克体重，腹腔注射50毫克1%戊巴比妥；（2）待小鼠麻醉后，进行手术区域器械准备及酒精消毒，小鼠手术区域为耻骨联合上方1 cm处为横行切口，拉出一侧小鼠的睾丸及附睾，将睾丸及附睾放置于纱布上，转移至体视显微镜下；（3）确定合适的亚砷酸钠浓度梯度（30、40、50mM），并使用注射针将包含0.5%固绿（由0.01M的PBS (Phosphate
‑
Buffered Saline)磷酸盐缓冲溶液配置）的亚砷酸钠溶液经输出小管（此为睾丸网入口）注射进入小鼠睾丸，注射角度为25～35
°
，并在注射过程中注意调整角度；（4）小鼠睾丸注射过程中，可看到绿色液体充盈曲细精管，注射液体量约为10 ul/3g小鼠体重），注射结束可看到小鼠睾丸变成绿色；（5）注射结束后，小心缝合小鼠腹部切口，并将小鼠置于保温毯上，同时注意观察
小鼠状态，包括呼吸频率，体温等，待小鼠恢复状态后，放回鼠笼中等待3h；（6）等待3h后，颈部脱臼法处死小鼠，分离睾丸组织，予以固定后，冰冻切片后（切片厚度为5微米），进行后续免疫荧光实验验证；所述免疫荧光实验验证为：若亚砷酸钠处理组的睾丸组织切片有明显的应激颗粒的标志物TIAR蛋白聚集点，并与精母细胞标志物DAZL共定位，为精母细胞阳性诱导组，可以应用于识别精母细胞产生应激颗粒，研究应激颗粒形成对精母细胞发育的影响；若亚砷酸钠处理组的睾丸组织切片有明显的应激颗粒形成，并与RNA结合蛋白SERBP1共定位，为RNA结合蛋白SERBP1阳性诱导组，可以应用于识别RNA结合蛋白SERBP1的产生，研究RNA结合蛋白SERBP1对应激颗粒形成的影响；所述SERBP1的基本信息为：基因名称(Ensembl) ：Ensembl:ENSMUSG00000036371；基因ID：66870；基因序列如序列表SEQ ID NO:1所示。
[0017]以下结合具体实施例对本专利技术的具体实现进行详细描述。
[0018]如图1所示，基于显微注射技术，将体外配置的包含固绿染液的亚砷酸钠溶液，通过输出小管，注射到小鼠睾丸组织，构建体内应激颗粒动物模型，步骤如下：（1）实验前使用1%戊巴比妥麻醉剂腹腔注射C57雄性小鼠（50毫克/千克体重）；（2）解剖小鼠，取出小鼠一侧的睾丸及附睾放置于纱布上，并转移至体式显微镜下；（3）使用注射针将包含固绿染液的亚砷酸钠溶液经输出小管（此为睾丸网入口）注射进入小鼠睾丸，注射角度为25～35
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将小鼠麻醉后，取出小鼠一侧的睾丸及附睾；将包含固绿染液的亚砷酸钠溶液经睾丸网入口注射进入小鼠睾丸中，所述亚砷酸钠溶液浓度为30
‑
50mM；缝合小鼠伤口，待小鼠恢复状态，等待3h后处死小鼠，分离睾丸组织后切片，进行免疫荧光实验，当有明显的应激颗粒形成，则表示模型构建成功。2.根据权利要求1所述的小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法，其特征在于，将小鼠麻醉的步骤中，腹腔注射50mg 1%浓度的戊巴比妥/1Kg小鼠体重。3.根据权利要求1所述的小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法，其特征在于，取出小鼠一侧的睾丸及附睾的步骤，具体包括：小鼠手术区域为耻骨联合上方1 cm处进行横行切口，拉出一侧小鼠的睾丸及附睾，将睾丸及附睾放置于纱布上，转移至体式显微镜下。4.根据权利要求1所述的小鼠睾丸组织应激颗粒动物模型的构建方法，其特征在于，将包含固绿染液的亚砷酸钠溶液经睾丸网入口注射进入小鼠睾丸中的步骤中，所述固绿染液浓度为0.5%，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凤丽，袁水桥，王玲娟，甘世明，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：