一种低成本、高效制备透明质酸不饱和二糖的方法技术

本发明专利技术涉及一种低成本、高效制备透明质酸不饱和二糖的方法。步骤如下：(1)将含有透明质酸裂解酶基因的重组乳酸克鲁维酵母发酵培养72～84h，得到发酵液A；(2)将兽疫链球菌发酵培养12～18h，得到发酵液B；将发酵液A和发酵液B混合均匀，混菌发酵培养12～24h，得到发酵液C；(3)将发酵液C先进行陶瓷膜过滤、超滤和纳滤膜脱盐浓缩，再经吸附脱色和喷雾干燥后，得到透明质酸不饱和二糖。该方法将含有透明质酸裂解酶基因的重组乳酸克鲁维酵母和兽疫链球菌混菌发酵培养，在兽疫链球菌生产透明质酸的同时对透明质酸进行裂解，得到透明质酸不饱和二糖。省去了提取纯化透明质酸裂解酶的步骤，极大的节省了成本，制备条件要求低，适合大规模生产。生产。

【技术实现步骤摘要】
一种低成本、高效制备透明质酸不饱和二糖的方法


[0001]本专利技术涉及一种低成本、高效制备透明质酸不饱和二糖的方法，属于透明质酸制备


技术介绍

[0002]透明质酸，又称玻尿酸、玻璃酸，是由N
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乙酰氨基葡萄糖和D
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葡萄糖醛酸以β
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1,3糖苷键组成双糖单位，双糖单位又以β
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1,4糖苷键重复连接构成的无分支高分子糖胺聚糖。透明质酸的分子量一般在105～107道尔顿，按照分子量大小不同，可以分为高分子、中分子、低分子和寡聚透明质酸。透明质酸二糖是最小的组成单位，由于在葡萄糖醛酸的4～5糖苷键处存在不饱和双键，因此透明质酸二糖是一种不饱和的二糖。相关研究发现，透明质酸不饱和二糖具有较强的抗氧化性，并能够明显促进人脐静脉内皮细胞和人角膜细胞的增殖，在医药、化妆品领域具有比较广阔的应用前景。中低分子和寡聚透明质酸的制备方法主要有酸水解、碱水解、酶水解等。
[0003]中国专利文献CN110982862A公开了一种大规模制备高纯度不饱和透明质酸二糖的方法，采用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种低成本、高效制备透明质酸不饱和二糖的方法，其特征在于，包括步骤如下：(1)将含有透明质酸裂解酶基因的重组乳酸克鲁维酵母发酵培养72～84h，得到发酵液A；(2)将兽疫链球菌发酵培养12～18h，得到发酵液B；然后将发酵液A和发酵液B混合均匀，混菌发酵培养12～24h，得到含有透明质酸不饱和二糖的发酵液C；(3)将含有透明质酸不饱和二糖的发酵液C先进行过滤、超滤和脱盐浓缩，再经吸附脱色和喷雾干燥后，得到透明质酸不饱和二糖。2.如权利要求1所述的低成本、高效制备透明质酸不饱和二糖的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述透明质酸裂解酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.如权利要求1所述的低成本、高效制备透明质酸不饱和二糖的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述含有透明质酸裂解酶基因的重组乳酸克鲁维酵母的构建方法如下：a、人工合成如SEQ ID NO.1所示的透明质酸裂解酶基因，然后将透明质酸裂解酶基因连接至pKLAC1载体，得到重组质粒pKLAC1
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hyl；再将重组质粒pKLAC1
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hyl转入大肠杆菌E.coli JM109，得到重组大肠杆菌E.coli JM109/pKLAC1
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hyl；b、将重组大肠杆菌E.coli JM109/pKLAC1
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hyl过夜培养，提取重组质粒pKLAC1
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hyl；利用SacII限制性酶对重组质粒pKLAC1
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hyl进行线性化酶切后回收，得到线性化的重组质粒pKLAC1
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hyl；c、制备乳酸克鲁维酵母Kluyveromyces lactis GG799感受态细胞，通过电脉冲法将线性化的重组质粒pKLAC1
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hyl转化至乳酸克鲁维酵母Kluyveromyces l...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱云峰，苏移山，朱希强，张兆倩，
申请(专利权)人：山东丰金美业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：