靶向MAGE-A4肽的细胞/基因疗法制造技术

本公开涉及用于治疗患有与MAGE

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向MAGE
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A4肽的细胞/基因疗法
相关申请交叉引用
[0001]本申请要求2020年6月11日提交的美国临时申请号63/037,758和2021年1月6日提交的美国临时申请号63/134,313的权益；所有这些都以全文引用的方式并入本文。序列表信息
[0002]于2021年5月24日或前后创建的名为“sDS1.0099PCT_ST25.txt”的计算机可读文本文件，文件大小约为35.7KB，包含本申请的序列表，并在此以全文引用的方式并入本文。


[0003]本公开涉及修饰细胞(包括遗传修饰细胞)的组合物和用于细胞扩增和维持的方法及其用途，以治疗包括癌症在内的疾病。背景
[0004]癌症的特征是侵入或扩散到身体其他部位的细胞异常生长。在人类中，有一百多种癌症，比如发生在肺组织中的肺癌。由于肺癌细胞失去了正常细胞的特性，因此肺癌细胞之间的联系也就消失了。一旦癌细胞脱落，它们就会通过血液和/或淋巴系统扩散到整个身体并危及生命。目前，肺癌是男性和女性癌症死亡的主要原因，是男性和女性中第二常见的癌症。据报道，黑色素瘤抗原家族A4(MAGE
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A4)在许多恶性肿瘤中过度表达，包括肺癌、结肠癌和膀胱癌。因此，MAGE
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A4是包括非小细胞肺癌在内的多种恶性肿瘤的免疫治疗靶点。技术方案
[0005]本公开描述了嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含胞外域、跨膜域和胞内域，并且其中所述胞外域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或13。在实施方案中，所述CAR结合MAGE
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A4。在实施方案中，CAR结合包含氨基酸序列SEQ ID NO：14的MAGE
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A4肽。在实施方案中，CAR包含氨基酸序列SEQ ID NO：11或12。在实施方案中，CAR包含氨基酸序列SEQ ID NO：15、16或17。
[0006]实施方案描述了包含本文所述的CAR和载体的组合物。实施方案描述了包含本文所述的CAR和药学上可接受的载体的药物组合物。实施方案描述了编码上述CAR的核酸。实施方案描述了包含编码上述CAR的核酸的载体、细胞或细胞群。在实施方案中，细胞群包含T细胞。实施方案描述了包含上述T细胞群的药物组合物。实施方案描述了在有需要的受试者中刺激抗肿瘤免疫反应的方法，该方法包括向受试者施用有效量的本文所述的药物组合物，从而刺激抗肿瘤免疫反应。在实施方案中，受试者被诊断患有肺癌、结肠癌或膀胱癌。实施方案描述了在表达MAGE
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A4肽的细胞群中刺激免疫反应的方法，该方法包括使表达MAGE
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A4肽的细胞群与有效量的上述药物组合物接触。
[0007]本
技术实现思路
并非旨在识别所要求保护的主题的关键特征或基本特征，也不旨在用于限制所要求保护的主题的范围。附图的简要说明
[0008]参考附图描述了详细描述。在不同的图中使用相同的附图标记表示相似或相同的项目。
[0009]图1显示了T细胞上CAR和CD137表达的流式细胞术结果。
[0010]图2显示了与底物细胞共培养24小时的CAR T细胞上CD137表达的流式细胞术结果。
[0011]图3A和3B用直方图来显示图2的流式结果。
[0012]图4A和4B显示与底物细胞共培养24小时的CAR T细胞的细胞因子释放。
[0013]图5A、5B和5C显示了MAGE
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A4 CAR T细胞在体外实验中的抗肿瘤作用。
[0014]图6A和6B显示了与底物细胞共培养的MAGE
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A4 CAR T细胞的细胞因子释放和细胞扩增。
[0015]图7A、7B和7C显示体内实验方案的示意图以及证明MAGE
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A4 CAR T具有抗肿瘤活性的体内实验结果。
[0016]图8显示了图7所示实验的小鼠中肿瘤体积的变化。
[0017]图9A和9B显示MAGE
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A4 CAR之间的抗肿瘤活性比较，包括4
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1BB(MAGE
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A4 4
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1BB CAR)或CD28(MAGE
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A4 CD28 CAR)的共刺激结构域。
实施例
[0018]除非另外定义，否则本文所用的所有技术术语和科学术语具有与本公开所属领域中的普通技术人员所通常理解的相同的含义。尽管可在本公开的实践或测试中使用与本文描述的那些类似或等效的任何方法和材料，但还是描述了优选的方法和材料。为了本公开的目的，以下术语定义如下。
[0019]本文使用冠词“一个/种(a/an)”是指一个或多于一个(即，至少一个)物品的语法对象。举例来说，“一种要素”意指一种要素或多于一种要素。
[0020]“大约”意指数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度相对于参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度变化多达20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。
[0021]如本文所用，术语“激活”是指已被充分刺激以诱导可检测的细胞增殖的细胞状态。激活也可以与诱导的细胞因子产生和可检测的效应子功能相关。术语“激活的T细胞”尤其是指正在进行细胞分裂的T细胞。
[0022]术语“抗体”的使用范围最广，是指单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的生物学活性或功能即可。本公开中的抗体可以以各种形式存在，包括例如多克隆抗体、单克隆抗体、Fv、Fab、Fab
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和F(ab
’
)2片段；以及单链抗体和人源化抗体(Harlow等人,1999,In:Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY；Harlow等人,1989,In:Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,New York；Houston等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879
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5883；Bird等人,1988,Science 242:423
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426)。
[0023]术语“抗体片段”是指全长抗体的一部分，例如，抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的其他实例包括Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
[0024]术语“Fv”是指包含完整抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。该片段由紧
密、非共价缔合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。通过这两个结构域的折叠，产生了六个高变环(3个环来自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，并且其中所述细胞外结构域包含SEQ ID NO:10或13的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的CAR，其中所述CAR结合黑素瘤相关抗原4(MAGE
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A4)肽。3.根据权利要求1所述的CAR，其中所述CAR结合包含SED ID NO:14的MAGE
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A4肽的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的CAR，其中所述CAR包含SED ID NO：11或12的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的CAR，其中所述CAR包含SED ID NO：16或17的氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的CAR，其中所述细胞内结构域包含CD3 zeta、DAP10、DAP12、FcεRIγ、Fyn、Lck、Syk、Zap70中的一个或多个信号结构域。7.根据权利要求1所述的CAR，其中所述细胞内结构域还包含共刺激结构域，所述共刺激结构域包含CD27、CD28、4
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1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD
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1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA
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1)、CD2、CD7、CD40
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MyD88、CD244、NKG2D、LIGHT、NKG2C和B7
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H3中的一个或多个细胞内结构域。8.一种组合物，其包...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖磊，蒲程飞，曹志远，沈晓刚，陈冬祺，贾贝贝，田乐，
申请(专利权)人：创新细胞治疗公司，
类型：发明
国别省市：