一种用于猪耳组织成纤维细胞培养的样品采集方法技术

本发明专利技术公开了一种用于猪耳组织成纤维细胞培养的样品采集方法，该方法包括场内操作、场外操作及实验室预操作，场内操作为先用温水将猪耳部血管较少的耳边缘擦洗干净，用生理盐水冲洗擦多次，再用酒精棉球擦拭多次，剪下小块猪耳组织放入含双抗的生理盐水中送出场区。场外操作为将场内操作处理过的小块猪耳组织放入酒精中，旋涡震荡，用生理盐水冲洗，将猪耳组织放入含双抗的DMEM培养液中，低温送回实验室。实验室预操作为将场外操作处理过的猪耳组织放入酒精中，旋涡震荡，用超纯水冲去酒精，用HBSS培养液清洗后刮去毛发和表皮，剪小后即可组织块培养。本发明专利技术中猪耳组织样品采集方法用时短，污染率低，过程可操作性强，试验结果可控性强。性强。

【技术实现步骤摘要】
一种用于猪耳组织成纤维细胞培养的样品采集方法


[0001]本专利技术涉及一种用于猪耳组织成纤维细胞培养的样品采集方法，属于生物


技术介绍

[0002]畜禽遗传资源保存的方法主要有活体动态保存和静态保种，其中静态保种包括体细胞、卵子、精子、胚胎的超低温冷冻保存和DNA文库保存。体细胞冷冻保存因其方法成熟，效率高，可操作性强，且样品采集时对动物影响较小，故比胚胎冷冻保存等方法更为便捷。随着细胞体外培养技术的成熟，细胞可以在体外维持生命活动正常有序进行。有研究报道，采用猪的颗粒细胞、皮肤成纤维细胞作为供体，均已成功获得克隆猪。猪耳组织成纤维细胞，获取方式简单，培养容易，增殖快速，可以有效保存个体全部遗传信息，在此基础上可以进一步构建地方猪种的成纤维细胞库。通过耳组织采样、体细胞建系和冷冻保存，再借助动物体细胞克隆技术，可实现地方猪种种质资源的长期保存。
[0003]现有猪耳组织采样的技术主要有：(1)将猪只保定，用75％酒精棉球擦拭猪耳采样部位，用U型剪耳钳剪取1
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2块耳组织，在75％酒精中迅速刷洗20
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于猪耳组织成纤维细胞培养的样品采集方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)场内操作：在猪场生产区内用温水将猪耳部血管较少的边缘擦洗干净，用生理盐水冲洗擦洗过的猪耳边缘多次，再用酒精棉球擦拭多次，剪下小块猪耳组织放入含双抗的生理盐水中送出场区；(2)场外操作：将经过步骤(1)处理过的小块猪耳组织放入酒精中，旋涡震荡，用生理盐水冲去酒精，将猪耳组织放入含双抗的DMEM培养液中，低温送回实验室；(3)实验室预操作：将经过步骤(2)处理过的猪耳组织放入酒精中，旋涡震荡，用超纯水冲去酒精，用HBSS培养液清洗数次后，刮去表面毛发和表皮，剪小后即可进行组织块培养。2.根据权利要求1所述的用于猪耳组织成纤维细胞培养的样品采集方法，其特征在于，步骤(1)中，用温水进行清洗至表面干净，温水用量为1
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2L，用生理盐水冲洗3
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4次，每次生理盐水用量为8
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10mL，用酒精棉球擦拭3
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4次，每次更换新的酒精棉球。3.根据权利要求1所述的用于猪耳组织成纤维细胞培养的样品采集方法，其特征在于，步骤(1)中，剪下小块猪耳组织为1.0
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1.5cm2，含双抗的生理盐水中的双抗为青霉素和链霉素，含双抗的生理盐水中青霉素和链霉素的浓度均为500IU/mL，含双抗的生理盐水的用量为每1.0cm2的猪耳组织样品1.0
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【专利技术属性】
技术研发人员：丁晓兰，吴井生，杨剑波，邢军，
申请(专利权)人：苏州市吴中区畜牧兽医站苏州市吴中区动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：