一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法。与现有技术相比，本发明专利技术提供的一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法，对提取方法和培养体系均进行了优化，采用不含动物源性成分的基础培养基，避免了血清带来的污染且批次稳定性差的不足，并且获得数量和细胞总增殖倍数均有明显提高，所用培养时间短，培养2小时即可看到细胞贴壁，整个HUVECs培养工艺标准化、程序化、规范化，为临床应用提供保障。为临床应用提供保障。为临床应用提供保障。

【技术实现步骤摘要】
一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法。

技术介绍

[0002]脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）是单层扁平上皮，连续覆盖在血管内膜，构成血管壁与血液之间的机械屏障，具有重要的生理功能，广泛参与了炎性反应、血管新生、免疫应答、动脉粥样硬化、血管张力调节等生理及病理过程，血管内皮细胞功能失调与许多心血管疾病的发生有关。与人体动脉内皮细胞相比，HUVECs取材经济、操作简便，且具有与动脉内皮细胞生物学特征相似的优点。
[0003]对于HUVECs的分离培养方法的研究确立是细胞存储、扩增、移植应用和产业化的重要基础，目前，脐静脉内皮细胞的获取方式对细胞的纯度和数量影响较大，目前有酶法和非酶法两种，非酶法主要包括：机械刮取、组织块移植等，但是获取过程容易损伤细胞、易混杂其它血管成分细胞，不推荐使用。而酶消化法常用的消化酶主要是胰蛋白酶和胶原酶，胶原酶消化效率适当，收获细胞数量多、结构本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法，其特征在于包括以下步骤：S1.样本预处理：将新鲜脐带清理、消毒，将消毒后的脐带用清洗液进行清洗，去除夹痕、凝血阻塞的脐带部分，并暴露脐带中动脉和静脉开口；S2.HUVECs的原代培养：注射器灌洗脐静脉后，再将脐带一端夹闭，从另一端用注射器向所述脐静脉内注入消化液，直至血管充盈，振荡消化10
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15min，收集HUVECs细胞，接种于培养瓶中，加入专用培养液，进行原代培养；S3.HUVECs的扩增培养：观察培养瓶中细胞状态，待细胞融合度达到75 %
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90 %后，加入专用培养液，进行传代扩增培养。2.根据权利要求1所述的一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法，其特征在于：所述清洗液为含青霉素、链霉素和两性霉素的生理盐水溶液。3.根据权利要求1所述的一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法，其特征在于：所述消化液包括胰蛋白酶和吐温
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80，所述胰蛋白酶的浓度为1
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5mg/mL，所述吐温
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80的含量为15
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25mg/mL。4.根据权利要求1所述的一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法，其特征在于：所述振荡消化条件为，在37℃下，振荡转速为100
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150rpm，消化时间为10
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15min。5.根据权利要求1所述的一种人脐静脉血管内皮细胞的分离培养方法，其特征在于：所述专用培养液由无血清基础培养基、重组蛋白、中药提取物和脂联素组成；每1L基础培养基中含有1.5
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【专利技术属性】
技术研发人员：李晓玉，岳云强，李若鲲，唐云雯，柴莉，付云云，武威，陈晖，马浩天，
申请(专利权)人：北京国卫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：