一种基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒及其应用，本发明专利技术属于核酸检测技术领域。一种基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒，包括主探针、辅探针、锚探针和荧光探针、靶标小核酸的扩增引物对和磁珠样本释放剂；主探针依次包括辅探针结合区、靶标小核酸结合区和锚探针结合区；辅探针结合区包括扩增靶标小核酸的上游引物互补区和荧光探针互补区；锚探针结合区与扩增靶标小核酸的下游引物互补；所述锚探针或主探针的5

【技术实现步骤摘要】
一种基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于核酸检测
，具体涉及一种基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]小核酸(miRNA，微小核糖核酸)是一类长约20～24个核苷酸(nt)的单链非编码小分子RNA，广泛存在于人体组织、细胞、血液、体液内，具有重要的基因调节功能，其表达异常与各种疾病尤其肿瘤的发生发展转移密切相关。细胞外小核酸(cell
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free miRNA，cfmiRNA)又称循环小核酸(circulating miRNA,ctmiRNA)，是一类通过细胞主动分泌或组织损伤和细胞破裂等被动渗漏方式释放进入、并以被外泌体或微囊泡包裹或与蛋白质结合的形式、稳定地存在于血液及其他体液中的小核酸，适合成为疾病检测的分子标记物。血液异常富集的肿瘤来源的cfmiRNA可发生在肿瘤早期阶段，源自组织原位肿瘤细胞的表达和分泌，而循环肿瘤细胞(CTC)和游离DNA(ctDNA)通常则是肿瘤晚期阶段肿瘤细胞直接转移进入血液的结果，因此，cfmiRNA检测比CTC和ctDNA检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒，其特征在于，包括探针组、靶标小核酸的扩增引物对和磁珠样本释放剂；所述探针组包括主探针、辅探针、锚探针和荧光探针；所述主探针依次包括辅探针结合区、靶标小核酸结合区和锚探针结合区；所述主探针的长度与辅探针、靶标小核酸和锚探针的总长度一致；所述辅探针结合区包括扩增靶标小核酸的上游引物互补区和荧光探针互补区，所述辅探针结合区的长度与扩增靶标小核酸的上游引物和荧光探针的总长度一致；所述锚探针和锚探针结合区的长度一致，所述锚探针结合区与扩增靶标小核酸的下游引物互补；所述锚探针或主探针的5
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末端标记有生物素；所述磁珠样本释放剂包括40～80mM氯化锌、40～80mM乙酸钠、40～80mM半胱氨酸、质量百分含量10％～18％碳酸亚乙酯、体积百分含量10％～30％甲酰胺、质量百分含量4％～10％十二烷基硫酸钠、90～200μg/ml链霉亲和素修饰磁珠。2.根据权利要求1所述基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒，其特征在于，所述的主探针的3
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末端碱基为腺嘌呤。3.根据权利要求1或2所述基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒，其特征在于，所述锚探针结合区的核苷酸序列为SEQ ID NO:3；所述锚探针的核苷酸序列为SEQ ID NO:4。4.根据权利要求3所述基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒，其特征在于，所述扩增靶标小核酸的下游引物核苷酸序列为SEQ ID NO:5。5.根据权利要求1所述基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒，其特征在于，所述辅探针结合区的核苷酸序列为SEQ ID NO:1；所述辅探针的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。6.根据权利要求5所述基于探针锚定双链的小核酸检测试剂盒，其特征在于，所述扩增靶标小核酸的上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:6；所述荧光探针的核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凯，徐逸丽，陈燃，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：