本发明专利技术涉及一种检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备妇科恶性肿瘤诊断产品中的应用；所述妇科恶性肿瘤为卵巢癌、子宫颈癌或者子宫内膜癌。相对于传统技术，本申请的有益效果包括：本申请的发明专利技术人发现了与妇科恶性肿瘤卵巢癌、子宫颈癌或者子宫内膜癌相关的一组标志物，采用检测该组标志物的DNA的甲基化水平的试剂，能够实现妇科恶性肿瘤的无创及早期诊断，且具有检测灵敏度高、特异性高以及便捷的特点。特点。
【技术实现步骤摘要】
检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备妇科恶性肿瘤诊断产品中的应用
[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体而言，涉及一种检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备妇科恶性肿瘤诊断产品中的应用。
技术介绍
[0002]妇科恶性肿瘤即女性生殖系统肿瘤，主要包括卵巢癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、输卵管癌等，其严重威胁妇女的身心健康，是导致妇女死亡的主要原因之一。在妇科恶性肿瘤中，子宫内膜癌发病率最高，而卵巢癌死亡率最高。一些妇科恶性肿瘤在发病早期通常无特异性的病症，多数患者因身体不适到医院进行检查时病程已进入中晚期，从而错失了最佳的手术治疗时机。因此，要加强对妇女的健康教育，提高其保健意识和健康观念，此外，还需建立全面的筛查制度，促进妇科恶性肿瘤的筛查、早期诊断和早期治疗，以提高患者的治愈率，为患者减少痛苦，减轻经济负担。
[0003]卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，其起病隐匿，恶性程度高，5年生存率仅有20％
‑
36％。卵巢上皮性癌是最常见的卵巢恶性肿瘤的病理类型，约占卵巢恶性肿瘤的80％。目前常用的诊断卵巢癌的方法包括肿瘤标志物检查、影像学检查以及组织病理学检查等。血清糖类抗原125(CA
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125)、人附睾蛋白4(HE
‑
4)等是辅助诊断卵巢上皮性癌的常用标志物，但是其检测早期卵巢癌的灵敏性较低，且特异性差。同样，影像学检测对于早期卵巢癌以及卵巢未发生明显形态学改变的病变敏感性较低。组织病理学检查是诊断卵巢癌的金标准，但是卵巢深居盆腔，需要穿刺或腹腔镜手术才可以进行病理组织取样。
[0004]近年来，宫颈癌的发病形势十分严峻，且发病出现低龄化的现象。目前已经确认持续的高危型HPV感染是宫颈上皮内瘤样病变的必要条件，但是，80％的妇女感染HPV为一过性，因此对于HPV阳性感染者进行宫颈癌前病变或宫颈癌诊断具有十分重要的意义。
[0005]随着人口平均寿命的增加和生活习惯的改变，子宫内膜癌的发病率近20年呈持续上升和年轻化趋势。目前，尚没有推荐的用于子宫内膜癌的常规筛查方法，在血液学方面，也没有特异敏感的血清标志物用于定期监测。
[0006]因此，采用良好的血清学标志物来筛查或诊断以上妇科恶性肿瘤，对于妇科恶性肿瘤的早发现、早治疗具有重大意义。
[0007]有鉴于此，特提出本申请。
技术实现思路
[0008]本申请实施例的目的之一包括将检测分子标记物甲基化水平的试剂用于妇科恶性肿瘤诊断产品的制备，采用该诊断产品能够实现妇科恶性肿瘤的无创及早期诊断。
[0009]在本申请的第一方面，提供检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备妇科恶性肿瘤诊断产品中的应用；
[0010]所述目标区域为如下定义的区域1、区域2、区域3、区域4、区域5、区域6、区域7和区
域8的组合：
[0011]以GRCh38.p14为参考，
[0012]区域1为Chr1:110068235
‑
110068349正链，
[0013]区域2为Chr3:147396065
‑
147396198正链，
[0014]区域3为Chr6:28259254
‑
28259365正链，
[0015]区域4为Chr6:50724522
‑
50724658正链，
[0016]区域5为Chr6:100447207
‑
100447333正链，
[0017]区域6为Chr7:8442522
‑
8442428负链，
[0018]区域7为Chr13:112067432
‑
112067313负链，
[0019]区域8为Chr20:21713905
‑
21714021正链；
[0020]所述妇科恶性肿瘤为卵巢癌、子宫颈癌或者子宫内膜癌。
[0021]在本申请的一些实施方式中，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区域的甲基化水平的检测：甲基化特异性PCR、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和荧光定量法。
[0022]在本申请的一些实施方式中，所述试剂包括检测所述目标区域的甲基化水平的引物对，或者还包括检测所述目标区域的检测探针。
[0023]在本申请的一些实施方式中，所述试剂包括具备如下技术特征中的一个或者多个的检测所述目标区域的甲基化水平的检测引物对和所述检测引物对对应的检测探针：
[0024]检测所述区域1的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示；
[0025]检测所述区域2的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示；
[0026]检测所述区域3的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示；
[0027]检测所述区域4的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.26和SEQ ID NO.27所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示；
[0028]检测所述区域5的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示；
[0029]检测所述区域6的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.32和SEQ ID NO.33所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示；
[0030]检测所述区域7的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.35和SEQ ID NO.36所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.37所示；和，
[0031]检测所述区域8的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.38和SEQ ID NO.39所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.40所示。
[0032]在本申请的一些实施方式中，所述试剂还包含检测内参基因的检测引物对和所述检测引物对对应的检测探针；所述内参基因包含ACTB基因。
[0033]在本申请的一些实施方式中，检测所述ACTB基因的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.41和SEQ ID NO.42所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.35所示。
[0034]在本申请的一些实施方式中，检测的样本包括细胞样本、组织样本或者尿液样本。
[0035]在本申请的第二方面，提供一种妇科恶性肿瘤诊断试剂盒，包括本申请第一方面中所定义本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备妇科恶性肿瘤诊断产品中的应用；所述目标区域为如下定义的区域1、区域2、区域3、区域4、区域5、区域6、区域7和区域8的组合：以GRCh38.p14为参考，区域1为Chr1:110068235
‑
110068349正链，区域2为Chr3:147396065
‑
147396198正链，区域3为Chr6:28259254
‑
28259365正链，区域4为Chr6:50724522
‑
50724658正链，区域5为Chr6:100447207
‑
100447333正链，区域6为Chr7:8442522
‑
8442428负链，区域7为Chr13:112067432
‑
112067313负链，区域8为Chr20:21713905
‑
21714021正链；所述妇科恶性肿瘤为卵巢癌、子宫颈癌或者子宫内膜癌。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区域的甲基化水平的检测：甲基化特异性PCR、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和荧光定量法。3.根据权利要求1或者2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测所述目标区域的甲基化水平的引物对，或者还包括检测所述目标区域的检测探针。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括具备如下技术特征中的一个或者多个的检测所述目标区域的甲基化水平的检测引物对和所述检测引物对对应的检测探针：检测所述区域1的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示；检测所述区域2的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ...
【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书二页说明书一三页序列表电子公布，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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