一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方法技术

本发明专利技术提供一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方法，以甘露糖10%（w/v）含量的中加入培养基进行微生物菌液发酵培养，混合均匀后发酵6天，在土壤中均匀微生物菌液并翻地、翻耕；将含磷材料经碾碎后土壤中均匀撒施，再次翻地、翻耕；本发明专利技术的原材料来源广泛，成本低廉，制备工艺简单，提高微生物的定殖能力，操作简单，有很广阔的应用前景。有很广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方法
[0001]本专利技术属于土壤原位修复的
，具体涉及一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方法。

技术介绍

[0002]我国人口基数大，粮食需求高。土壤是农业产业发展的根本，也是满足我国人民基本物质生活需求的基础。若土壤被污染，农作物质量、产量均会受到不利影响。
[0003]不同污染地点的修复应因该地点发现的重金属污染元素、土壤的类型、污染的程度以及可能在该地点发生的自然过程而异。选择修复材料除了考虑修复效果外，还应避免造成二次污染，同时考虑成本效益问题，应采用修复技术应用成本低，对土壤肥力和代谢活性负面影响小，可以避免因污染物转移而对人类健康和环境产生影响的方法。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术公开了一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方法。
[0005]为达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方法，包括如下步骤：步骤（1）：以甘露糖10%（w/v）含量的中加入培养基进行微生物菌液发酵培养，混合均匀后发酵6天，获得微生物菌液；步骤（2）：在土壤中均匀撒施步骤（1）制备的微生物菌液并翻地、翻耕，使土壤pH降至pH5；步骤（3）：将含磷材料经碾碎后土壤中均匀撒施，再次翻地、翻耕。
[0006]进一步地，步骤（1）中所述微生物菌液为酵母菌。
[0007]进一步地，步骤（1）中所述微生物菌液为胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa) QD
‑2‑
6。
[0008]进一步地，步骤（2）中所述微生物菌液撒施的量为50~100kg/亩。
[0009]进一步地，步骤（3）中所述含磷材料包括重过磷酸钙磷和磷灰石矿尾料中的任意一种。
[0010]进一步地，步骤（3）中所述含磷材料用量为25~50kg/亩。
[0011]本专利技术的有益效果为：本专利技术的原材料来源广泛，成本低廉，制备工艺简单，提高微生物的定殖能力，操作简单，经济高效，适用酸、碱及中性土壤，改良受污染土壤的性质，提高土壤肥力，改良土壤，提高肥料利用率，有很广阔的应用前景。
[0012]实施方式
[0013]下面结合具体实施方式，进一步阐明本专利技术，应理解下述具体实施方式仅用于说
明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。
实施例
[0014]本实施例的修复重金属铅污染土壤的方法具体步骤如下：步骤（1）：以甘露糖10%（w/v）含量的中加入培养基进行微生物菌液发酵培养，混合均匀后发酵6天，获得微生物菌液； a.1 L 体系 YEPD 培养基的配置：无水葡萄糖 10 g、酵母粉提取粉5 g、大豆蛋白胨 10 g、氯霉素0.1 g、超纯水0.5 L，115 ℃灭菌20 min，常温备用。YEPD普通固体培养基在上述基础上加入琼脂 10 g。不同浓度Pb 2+ YEPD固体培养基在YEPD普通固体培养基基础上加适量 100 mg/mL Pb 2+液到所需浓度，115 ℃灭菌20min，60 ℃
‑
70 ℃条件下保存备用。
[0015] b.菌种活化：以50 μL的接种量接入10 mL的YEPD培养基中，30 ℃振荡培养 24 h，再以 200 μL 的接种量接入YEPD 中培养活化至生长对数末期，离心弃上清液收集菌体，菌用体无菌pH 7.4 的 PBS 溶液洗涤三次。
[0016]PBS 缓冲液：NaCl 3.20 g、KCl 0.08 g、KH2PO4
∙
2H2O 0.10 g、Na2HPO4
∙
12H2O0.58 g 以及蒸馏水 0.40 L，混匀，调 pH 至 7.4，115 ℃灭菌15 min，4 ℃条件下保存备用。
[0017]c.5L发酵罐培养：将种子液按培养基体积百分比5～8％的接种量接种到发酵罐，装液量60％，加入150g甘露糖，搅拌通入无菌空气，通气量1～1.5Vols/vol
·
min，搅拌转速180～260rpm，在30～35
°
C条件下培养36h，发酵罐培养基：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，磷酸氢二钾3g/L，葡萄糖2g/L。
[0018]步骤（2）：在土壤中均匀撒施步骤（1）制备的微生物菌液并翻地、翻耕，使土壤pH降至pH5；步骤（3）：将重过磷酸钙磷经碾碎后土壤中均匀撒施，再次翻地、翻耕。
[0019]步骤（1）、（2）整个阶段需用时20天。
[0020]表1为实施例1土壤处理前后铅含量变化铅含量(mg/kg土壤)处理前81.80处理后7.43钝化率91.4％
实施例
[0021]步骤（1）：以甘露糖10%（w/v）含量的中加入培养基进行微生物菌液发酵培养，混合均匀后发酵6天，获得微生物菌液； a.1 L 体系 YEPD 培养基的配置：无水葡萄糖 10 g、酵母粉提取粉5 g、大豆蛋白胨 10 g、氯霉素0.1 g、超纯水0.5 L，115 ℃灭菌20 min，常温备用。YEPD普通固体培养基在上述基础上加入琼脂 10 g。不同浓度Pb 2+ YEPD固体培养基在YEPD普通固体培养基基础上加适量 100 mg/mL Pb 2+液到所需浓度，115 ℃灭菌20min，60 ℃
‑
70 ℃条件下保存备用。
[0022] b. 菌种活化：以50 μL的接种量接入10 mL的YEPD培养基中，30 ℃振荡培养 24 h，再以 200 μL 的接种量接入YEPD 中培养活化至生长对数末期，离心弃上清液收集菌体，菌用体无菌pH 7.4 的 PBS 溶液洗涤三次。
[0023]PBS 缓冲液：NaCl 3.20 g、KCl 0.08 g、KH2PO4
∙
2H2O 0.10 g、Na2HPO4
∙
12H2O0.58 g 以及蒸馏水 0.40 L，混匀，调 pH 至 7.4，115 ℃灭菌15 min，4 ℃条件下保存备用。
[0024]c.5L发酵罐培养：将种子液按培养基体积百分比5～8％的接种量接种到发酵罐，装液量60％，加入150g甘露糖，搅拌通入无菌空气，通气量1～1.5Vols/vol
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min，搅拌转速180～260rpm，在30～35
°
C条件下培养36h，发酵罐培养基：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，磷酸氢二钾3g/L，葡萄糖2g/L。
[0025]步骤（2）：在土壤中均匀撒施步骤（1）制备的微生物菌液并翻地、翻耕，使土壤pH降至pH5；步骤（3）：将磷灰石矿尾料经碾碎后土壤中均匀撒施，再次翻地、翻耕。
[0026]步骤（1）、（2）整个阶段需用时15天。
[0027]表2为实施例2土壤处理前后铅含量变化铅含量(mg/kg土壤)处理前56.40处理后8.72钝化率84.7％需要说明的是，以上内容仅仅说明了本专利技术的技术思想，不能以此限定本专利技术的保护范围，对于本技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1）：以甘露糖10%（w/v）含量的中加入培养基进行微生物菌液发酵培养，混合均匀后发酵6天，获得微生物菌液；步骤（2）：在土壤中均匀撒施步骤（1）制备的微生物菌液并翻地、翻耕，使土壤pH降至pH5；步骤（3）：将含磷材料经碾碎后土壤中均匀撒施，再次翻地、翻耕。2.根据权利要求1所述的一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方法，其特征在于，步骤（1）中所述微生物菌液为酵母菌。3.根据权利要求1或2所述的一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈雷，俞亚东，王金龙，陆雪梅，孙永军，范小芳，刘安康，王明秀，
申请(专利权)人：南京沃谱瑞环境研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：