一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法和应用，包括以下步骤：取用胎儿血液置于试管中，将装有胎儿血液的试管添加入抗凝管中，对抗凝管中的血液添加抗凝剂，装有血液和抗凝剂的抗凝管放入血液离心机中，血液离心机对抗凝管中胎儿血液进行离心处理，离心后抗凝管中的胎儿血液出现分层，将每层占比进行记录，红细胞一般处于最低层。本发明专利技术具备可对红细胞中血红蛋白数量检测的优点，解决了现今对胎儿红细胞检测的方法一般只能够检测胎儿红细胞的数量，只通过胎儿红细胞数量判定胎儿是否健康，胎儿红细胞中血红蛋白数量无法进行检测，降低了检测准确率，不利于了解胎儿健康状况的问题。况的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法和应用


[0001]本专利技术涉及胎儿红细胞检测
，具体为一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法和应用。

技术介绍

[0002]红细胞或红血球，在常规化验中英文常缩写为RBC，是血液中为数最多的一类血细胞，同时也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介，同时还存在免疫功能，哺乳纲的成熟红细胞是无核的，这意味着它们失去了DNA，红细胞主要是通过无氧糖酵解来释放能量，而其中葡萄糖
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磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶就是红细胞进行无氧糖酵解的必须的酶类，如果这些酶活性下降或缺失，红细胞就不能进行无氧糖酵解，胎儿血液中含有的红细胞数量和质量可直观的表现处胎儿健康状况，为了保证胎儿的安全，需要定期对胎儿红细胞进行检测，现今对胎儿红细胞检测的方法一般只能够检测胎儿红细胞的数量，只通过胎儿红细胞数量判定胎儿是否健康，胎儿红细胞中血红蛋白数量无法进行检测，降低了检测准确率，不利于了解胎儿健康状况。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法和应用，具备可对红细胞中血红蛋白数量检测的优点，解决了现今对胎儿红细胞检测的方法一般只能够检测胎儿红细胞的数量，只通过胎儿红细胞数量判定胎儿是否健康，胎儿红细胞中血红蛋白数量无法进行检测，降低了检测准确率，不利于了解胎儿健康状况的问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法，包括以下步骤：
[0005]S1：取用胎儿血液置于试管中，将装有胎儿血液的试管添加入抗凝管中，对抗凝管中的血液添加抗凝剂，装有血液和抗凝剂的抗凝管放入血液离心机中，血液离心机对抗凝管中胎儿血液进行离心处理，离心后抗凝管中的胎儿血液出现分层，将每层占比进行记录，红细胞一般处于最低层，红细胞分层占比计算血液中红细胞占比，将最低层红细胞取出置入新试管中；
[0006]S2：将特异性鼠源单克隆抗体添加入红细胞中，鼠源单克隆抗体与红细胞内部相应蛋白结合，将流式细胞检测荧光剂倒入检测抗原中，流式细胞检测荧光剂对检测抗原标记，标记后的抗原添加入取出的红细胞中，抗原会与鼠源单克隆抗体进行结合，将结合后的红细胞放入纳米流式检测仪中，纳米流式检测仪放出激光照射红细胞，激光将抗原中标记的荧光剂被激活，荧光剂发出激发荧光和散射光，观察荧光占比了解被检测物质在红细胞液中占比，并检测发出荧光物质阳性比例。
[0007]优选的，所述血液离心机的型号为TGL
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C，在进行血液离心时血液离心机的转速为3000转每分钟，血液离心机对血液的离心时间为30分钟。
[0008]优选的，所述抗凝剂为柠檬酸钠，在柠檬酸钠添加入抗凝管中后需要颠倒混匀5
次，柠檬酸钠与血液占比为1∶4。
[0009]优选的，所述血液在离心后通常会出现三层分层，这三层分层分别为血浆、红细胞和血红蛋白，其中血浆密度较小处于最上层，红细胞密度次之处于中层，红细胞中含量最多处于最下层，血浆颜色为淡黄且透明，白细胞颜色为白色且不透明，红细胞颜色为深红，在胎儿发育的不同时期血液分层液不同，妊娠最后4
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6周胎儿体内成人血红蛋白逐渐增多，占75％左右，妊娠8周后胎儿血液循环中出现粒细胞，妊娠32周胎儿的胸腺、脾产生淋巴细胞，从而产生白细胞。
[0010]优选的，所述分层取出的红细胞试管需要放置在低温箱中进行保存，低温箱的温度需要保持在4摄氏度左右，切保存时间不可超过24小时。
[0011]优选的，所述鼠源单克隆抗体需要存储在冷库中，鼠源单克隆抗体的存储位置为零下20摄氏度或零下80摄氏度，存储鼠源单克隆抗体中需要添加抗微生物药物。
[0012]优选的，所述纳米流式检测仪中含有前向光电二极管和90
°
方向的光电倍增管，激发荧光和散射光会被前向光电二极管和90
°
方向的光电倍增管接收，光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小，荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。
[0013]一种胎儿红细胞流式细胞检测的应用，包括以下步骤：
[0014]A：当需要对全血中红细胞数量进行检测时，将全血样本取出并放置在检查试管中，并放置在合适环境中进行保存，保存时间不可过长，将与红细胞表面抗原相对应的鼠源单克隆抗体添加入全血中，鼠源单克隆抗体会与红细胞表面对应抗原结合，在此期间需要对与鼠源单克隆抗体对应的特殊抗原进行染色，将特殊荧光染色剂添加入特殊抗原中，对特殊抗原进行染色，将染色完成后的特殊抗原添加鼠源单克隆抗体与全血的混合液中，得到新的混合液，后将上述新的混合液放入纳米流式检测仪中，通过纳米流式检测仪放出激光将特殊抗原中荧光染色剂激活，使其放出激发荧光和散射光，通过对激发荧光和散射光收集检测，检测结束后，需要对全血中阳性细胞比例进行检查，通过上述检测结果测定出红细胞数量和红细胞大小；
[0015]B：当需要对红细胞内部血红蛋白数量进行检测时，将全血样本进行离心处理，将离心处理后分层处的红细胞取出，取出的红细胞放置在合适环境中进行保存，后对红细胞进行破壁处理，使红细胞破碎，使红细胞中血红蛋白从红细胞中流出，向红细胞液中添加与血红蛋白对应的鼠源单克隆抗体，鼠源单克隆抗体会与血红蛋白结合，在此过程中，需要对与鼠源单克隆抗体相对应的特殊抗原进行染色，通过特殊染色剂对特殊抗原进行染色，将染色完成后的特殊抗原添加鼠源单克隆抗体与红细胞液的混合液中，得到新的混合液，后将上述新的混合液放入纳米流式检测仪中，通过纳米流式检测仪放出激光将特殊抗原中荧光染色剂激活，使其放出激发荧光和散射光，通过对激发荧光和散射光收集检测，检测结束后，需要对红细胞液中阳性血红蛋白比例进行检查，通过上述检测结果测定出血红蛋白数量和血红蛋白大小。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0017]本专利技术具备可对红细胞中血红蛋白数量检测的优点，解决了现今对胎儿红细胞检测的方法一般只能够检测胎儿红细胞的数量，只通过胎儿红细胞数量判定胎儿是否健康，胎儿红细胞中血红蛋白数量无法进行检测，降低了检测准确率，不利于了解胎儿健康状况
的问题。
具体实施方式
[0018]一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法，包括以下步骤：
[0019]S1：取用胎儿血液置于试管中，将装有胎儿血液的试管添加入抗凝管中，对抗凝管中的血液添加抗凝剂，装有血液和抗凝剂的抗凝管放入血液离心机中，血液离心机对抗凝管中胎儿血液进行离心处理，离心后抗凝管中的胎儿血液出现分层，将每层占比进行记录，红细胞一般处于最低层，红细胞分层占比计算血液中红细胞占比，将最低层红细胞取出置入新试管中；
[0020]S2：将特异性鼠源单克隆抗体添加入红细胞中，鼠源单克隆抗体与红细胞内部相应蛋白结合，将流式细胞检测荧光剂倒入检测抗原中，流式细胞检测荧光剂对检测抗原标记，标记本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：取用胎儿血液置于试管中，将装有胎儿血液的试管添加入抗凝管中，对抗凝管中的血液添加抗凝剂，装有血液和抗凝剂的抗凝管放入血液离心机中，血液离心机对抗凝管中胎儿血液进行离心处理，离心后抗凝管中的胎儿血液出现分层，将每层占比进行记录，红细胞一般处于最低层，红细胞分层占比计算血液中红细胞占比，将最低层红细胞取出置入新试管中；S2：将特异性鼠源单克隆抗体添加入红细胞中，鼠源单克隆抗体与红细胞内部相应蛋白结合，将流式细胞检测荧光剂倒入检测抗原中，流式细胞检测荧光剂对检测抗原标记，标记后的抗原添加入取出的红细胞中，抗原会与鼠源单克隆抗体进行结合，将结合后的红细胞放入纳米流式检测仪中，纳米流式检测仪放出激光照射红细胞，激光将抗原中标记的荧光剂被激活，荧光剂发出激发荧光和散射光，观察荧光占比了解被检测物质在红细胞液中占比，并检测发出荧光物质阳性比例。2.根据权利要求1所述的一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法，其特征在于：所述血液离心机的型号为TGL
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C，在进行血液离心时血液离心机的转速为3000转每分钟，血液离心机对血液的离心时间为30分钟。3.根据权利要求1所述的一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法，其特征在于：所述抗凝剂为柠檬酸钠，在柠檬酸钠添加入抗凝管中后需要颠倒混匀5次，柠檬酸钠与血液占比为1∶4。4.根据权利要求1所述的一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法，其特征在于：所述血液在离心后通常会出现三层分层，这三层分层分别为血浆、红细胞和血红蛋白，其中血浆密度较小处于最上层，红细胞密度次之处于中层，红细胞中含量最多处于最下层，血浆颜色为淡黄且透明，白细胞颜色为白色且不透明，红细胞颜色为深红，在胎儿发育的不同时期血液分层液不同，妊娠最后4
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6周胎儿体内成人血红蛋白逐渐增多，占75％左右，妊娠8周后胎儿血液循环中出现粒细胞，妊娠32周胎儿的胸腺、脾产生淋巴细胞，成为体内抗原，从而产生白细胞。5.根据权利要求1所述的一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法，其特征在于：所述分层取出的红细胞试管需要放置在低温箱中进行保存，低温箱的温度需要保持在4摄氏度左右，切保存时间不可超过24小时。6.根据权利要求1所述的一种胎儿红细胞流式细胞检测的方法，其特征在于：所述鼠源单克隆抗体需要存储在冷库...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵伟，梁江霞，陈帅，
申请(专利权)人：河北明志康华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：