一种提高25-OHVD项目灵敏度和精密度方法技术

本发明专利技术提供了一种提高25

【技术实现步骤摘要】
一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度方法


[0001]本专利技术涉及一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度的方法，属于免疫层析技术，更具体而言，本专利技术涉及一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度的方法。
技术背景
[0002]1背景
[0003]免疫层析技术分为纵向层析和侧向层析两种，本文主要是针对侧向层析技术。
[0004]免疫侧向层析诊断技术作为一种稳定和实用的技术适合在多样的即时检验(POCT)或者现场使用。按标记部分分为主要有胶体金免疫侧向层析法、普通荧光免疫侧向层析法、时间分辨荧光免疫侧向层析法、上转发光免疫侧向层析法、量子点荧光免疫侧向层析法等，按包被部分主要有硝酸纤维素膜、复合材料(fusion5)、微流控等。
[0005]免疫层析方法(immunochromatography assay,ICA)于1990年由Oskiowicz等建立。Oskiowicz应用的标记物为硒，其后一般均采用简便的胶体金，遂称为胶体金免疫层析方法。
[0006]随着免疫层析技术(immunochromatography)和胶体金技术的发展，尤其是90年代后，胶体金免疫侧向层析法(Gold immunochromatography assay,GICA)在体外诊断疾病检测中得到了广泛应用。
[0007]不过现在进行定量检测，对项目精密度及重复性要求越来越高，经过许多年的发展，最近各类荧光免疫侧向层析方法层出不穷。已成为主流先进技术被许多公司推崇。
[0008]2与本专利技术相关的现有技术
[0009]现在市场上常规产品先将标记好的荧光标记物稀释，用喷金仪将稀释后的荧光标记物喷涂在提前处理并且裁切好的标记物垫上，然后烘干备用，组装时将处理并裁切好的样品垫和附有荧光标记物的按附图的方式组装。该成品试剂使用时先将含25
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OH
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VD的样本和解离液加入离心管中孵育10min，然后将孵育后混合液加入到试纸条加样孔中。
[0010]免疫侧向层析法其原理是将特异性的抗体(抗原)先固定于硝酸纤维膜的某一区带，当干燥的硝酸纤维膜一端浸入样品(尿液、血清、血浆、全血或其他样品)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体(抗原)的区域时，样品中相应的抗原(抗体)即与该抗体(抗原)发生特异性结合，若用免疫胶体金可使该区域显示一定的颜色，肉眼观察或用相应的读数仪实现特异性的免疫诊断。若用荧光标记物，需要配套读数仪来完成数据采集，处理，验算得出相应的定量浓度值。
[0011]3现有技术不足
[0012]3.1现有技术标将标记好的荧光用喷金仪喷在标记物垫上时会导致整条(30cm长)标记物垫上荧光分布不均匀，裁切成4mm成品时每条含有荧光量具有差异，导致产品重复性较差。
[0013]3.2 25
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OH
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VD在体内与蛋白结合在一起，检测时需先将25
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OH
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VD与蛋白解离，现有技术荧光喷涂在标记物垫上由于层析时间较短，导致反应不充分灵敏度较低3.3组分较
多，操作复杂，生产效率低。

技术实现思路

[0014]为克服上有技术不足，本专利技术提供了一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度的方法。
[0015]技术方案：本方法创造性的将荧光标记物由点膜仪按5ul/人份均匀点在混匀板内，烘干备用，使用时加入样本和解离液溶解，混匀解离10min后，取混匀液加入到试纸条加样孔中。
[0016]由于液相的均匀度远远高于固相，所以混匀板每人份荧光量基本没有差异，重复性要优于将荧光喷涂在标记物垫上。
[0017]将标记有抗体的荧光标记物与样本和解离液在混匀板中预反应十分钟，大大增强抗体结合效率，提高灵敏度。
[0018]该方法去掉标记物垫，仅由一张样品垫组成，减少工序，降低人工成本。
[0019]与现有技术相比，本专利技术有益效果是：
[0020]荧光在液相条件下，均一性更好，成品条间荧光含量差异较小，提高产品重复性。
[0021]使用时标有抗体的荧光标记物在混匀板中能与抗原反应时间更长，反应更充分，提高产品灵敏度。
[0022]生产时组分减少，提高生产效率，降低成本，因组分少也能减少系统误差间接提高产品重复性。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0024]图1为本专利技术一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度方法一实施例原有技术原理图；
[0025]图2为本专利技术一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度方法一实施例创新技术原理图。
具体实施方式
[0026]本专利技术实施例与常规方法对比结果：
[0027]表1
[0028][0029][0030]解释：本方法重复性5.94％，明显优于对照方法11.99％。
[0031]表2
[0032][0033]解释：本方法浓度6.3T/C均值0.78，浓度33.9T/C均值0.22梯度明显好于对照(对照浓度6.3T/C0.35浓度33.9T/C 0.25)。
[0034]由表1和表2可以看出通过将25
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OH VD抗体
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荧光复合物点在混匀板上烘干，有效的提高的提高了产品的灵敏度和精密度，同时简化了产品结构，降低了产品的原料成本和人工成本，提高了企业的经济效益。
[0035]在本专利技术及上述实施例的教导下，本领域技术人员很容易预见到，本专利技术所列举的各原料和方法都能实现本专利技术，以及各原料和工艺的上下限取值、区间值都能实现本专利技术，在此不一一列举实施例。
[0036]在实际应用中技术人员根据本专利技术做出的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。此外应理解，本专利技术中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非另有说明；各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本专利技术可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更
技术实现思路
的情况下，当亦视为本专利技术可实施的范畴。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度的方法，其特征在于试剂盒内包含一个试纸条；解离液；混匀板。2.根据权利要求1所述的一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度的方法，其特征在于试纸条包含未处理样品垫，NC膜，吸水纸。3.根据权利要求1所述的一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度的方法，其特征在于NC膜上包被有25
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OH VD抗原。4.根据权利要求1所述的一种提高25
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OH VD项目灵敏度和精密度的方法，其特征在于所描述的混匀板为塑料板、酶标板、细胞培养板或离心管。5.根据权利要求1所述的一种提高25
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【专利技术属性】
技术研发人员：郭海鹏，刘延娟，
申请(专利权)人：北京乐普诊断科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：