一种输卵管特异性表达艾塞那肽的转基因鸡的制备方法技术

本发明专利技术属于转基因鸡的制备技术领域，公开一种输卵管特异性表达艾塞那肽的转基因鸡的制备方法。（1）、构建表达载体质粒pCSII

【技术实现步骤摘要】
一种输卵管特异性表达艾塞那肽的转基因鸡的制备方法


[0001]本专利技术属于转基因鸡的制备
，具体涉及一种输卵管特异性表达艾塞那肽的转基因鸡的制备方法。

技术介绍

[0002]近些年来制备转基因动物作为生物反应器生产药物蛋白已经取得了许多可喜的突破性进展，开创出了诱人、广阔的应用前景。从发展趋势来看，在不久的将来必定会成为生物工程技术研究领域最活跃、最具有实践应用价值的内容之一。最初，哺乳动物的乳腺反应器被认为是一个最有希望和前途的生物反应器之一，可是家畜世代间隔长、成本高，特别是乳汁中乳蛋白和乳脂肪的生化复杂性给重组蛋白的纯化带来许多意想不到的困难。与哺乳动物相比，禽类具有体格小、成本低、世代周期短、繁殖力高、卵中天然存在蛋白酶抑制剂、良好的无菌环境、好储存、易提纯等优点，特别是卵中表达的重组蛋白形成的三维结构糖基化更接近于人类蛋白质。所以，禽类输卵管生物反应器将逐步成为转基因动物和生物制药研究领域中最具活力的热点，并很可能成为未来最具有竞争力的新兴高技术产业之一。
[0003]但是，由于禽类独特的生殖、生理特点和胚胎发育的复杂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种输卵管特异性表达艾塞那肽的转基因鸡的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）、构建表达载体质粒pCSII
‑
ERE
‑
OV
‑
EXE，其结构如下：；其中，LTR：长末端重复序列；ERE，雌激素应答元件，如SEQ ID No.2 所示；OV Promoter，鸡卵清蛋白基因启动子，如SEQ ID No.3 所示；EXE，艾塞那肽cDNA序列，如SEQ ID No.1 所示；IRES，内部核糖体进入位点；SinLTR，自我灭活长末端重复序列；（2）、慢病毒包装将包装质粒pCAG
‑
HIVgp、包膜蛋白质粒pCMV
‑
VSV
‑
G
‑
RSV
‑
Rev和表达载体质粒pCSII
‑
ERE
‑
OV
‑
EXE按质量比1∶1∶2的比例转染293T细胞，培养、过滤，获得慢病毒溶液；（3）、新鲜鸡种蛋取回消毒后，孵化；（4）、将发育至第14
‑
15期的种蛋取出，表面消毒，上下轻轻晃动使胚胎脱离内层壳膜；在种蛋赤道附近打出一个直径4 mm的小孔，仔细剔除蛋壳膜，在显微镜下用显微注射仪将1
µ
L 滴度为1
×
10
9 TU/mL的慢病毒溶液注射到鸡胚卵黄外周静脉血管中，封堵注射口，封闭蛋壳开口，标记后继续孵化至出雏。2.如权利要求1所述的输卵管特异性表达艾塞那肽的转基因鸡的制备方法，其特征在于，步骤（2）的具体步骤为：将包装质粒pCAG
‑
HIVgp、包膜蛋白质粒pCMV
‑
VSV
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张自富，胡静，麻冰洁，赵瑜，秦清明，赵聘，赵云焕，
申请(专利权)人：信阳农林学院，
类型：发明
国别省市：