一种检测阿尔茨海默病致病基因突变和APOE基因型的引物组合及试剂盒制造技术

技术编号:37680272 阅读:26 留言:0更新日期:2023-05-28 09:33
本发明专利技术提供了一种通过恒温多重快速检测手段检测家族性阿尔茨海默病致病基因突变和APOE基因型的引物组合、试剂盒、检测体系、检测方法和应用。本发明专利技术的方法采用扩增阻遏突变系统技术结合切口内切酶核酸检测反应恒温扩增体系,针对阿尔茨海默病致病基因12个热点突变和2个风险位点共14个位点进行多重扩增,同时结合毛细管电泳进行产物分析,进行基因分型检测。测。

【技术实现步骤摘要】
一种检测阿尔茨海默病致病基因突变和APOE基因型的引物组合及试剂盒


[0001]本专利技术属于分子生物学领域,尤其是涉及一种基于恒温,多重扩增的基因SNP分型的检测方法及检测体系。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种神经系统的退行性疾病。AD的临床表现为记忆障碍、认知障碍、语言障碍、行为障碍、生活能力下降等,给患者带来极大的痛苦,造成生活质量下降。
[0003]随着我国社会老龄化的加剧,AD的发病率逐年增加,约90%以上的AD患者为散发性AD,剩余部分为家族性AD。尽管家族性AD占比不大,但由于我国人口基数庞大,所以家族性AD患者的数量仍然非常庞大。
[0004]对于家族性AD,基因检测是早期发现和诊断的重要方法。由于家族性AD突变位点较多,目前临床基因诊断家族性AD通常采用二代测序的方法。这种方法存在检测费用高,数据分析量大,等待结果时间长等缺点。常规PCR方法扩增技术操作复杂、检测周期长。目前尚未有廉价、快速的家族性AD致病基因检测手段。
专利技术内容
[00本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测家族性阿尔茨海默病致病基因突变和APOE基因型的3组引物组合,其特征在于,所述3组引物组合可实现一次性扩增如下14个风险位点:APP V715M;APP I716F;APP V717I;PSEN1 F105C;PSEN1 P117S;PSEN1 M139I;PSEN1 I167del;PSEN1 L173F;PSEN1 F177S;PSEN1 G206A;PSEN1 I213T;PSEN1 K311R;APOE C130R;和APOE R176C;其中3组引物中包含的每一条引物都包含一个切口内切酶限制位点的识别位点,一个稳定区域,一个与靶标互补的靶标结合区核酸链;以及各检测位点SNP识别特异性上游引物在3

端包括在

2或者

3位引入一个碱基的错配,和最后一个碱基对应SNP位点的碱基。2.根据权利要求1所述的3组引物组合,其特征在于,所述3组引物组合包括第一引物组、第二引物组和第三引物组;其中,所述第一引物组检测突变位点:APP V715M;PSEN1 F105C;PSEN1 G206A;和PSEN1 F177S;所述第二引物组检测突变位点:APP I716F;PSEN1 P117S;和PSEN1 I167del;所述第三引物组检测突变位点:APP V717I;PSEN1 L173F;PSEN1 M139I;PSEN1 I213T;PSEN1 K311R;APOE C130R;和APOE R176C;
其中,所述家族性阿尔茨海默病致病基因突变是针对中国汉族人群;其中,所述引物对针对每个位点包括野生型上游引物,突变型上游引物,和共用下游引物;其中所述第一引物组序列包括SEQ ID NO.1

3;SEQ ID NO.10

12;SEQ ID NO.28

30;和SEQ ID NO.25

27;所述第二引物组序列包括SEQ ID NO.4

6;SEQ ID NO.13

15;和SEQ ID NO.19

21;所述第三引物组序列包括SEQ ID NO.7

9;SEQ ID NO.22

24;SEQ ID NO.16

18;SEQ ID NO.31

33;SEQ ID NO.34

36;SEQ ID NO.37

39;和SEQ ID NO.40

42。3.根据权利要求2所述的引物组合,其特征在于,所述引物标记有用于后期毛细管电泳检测所识别的荧光基团,所述荧光基团修饰在特异性引物段的一个T碱基上,所述荧光基团可用FAM、HEX、ROX、TAMER或者CY5修饰,优选所述荧光基团标记在所述各检测位点共用下游引物的特异性引物段上距离切口内切酶识别位点3

末端的第2

10个碱基的一个T碱基上。4.根据权利要求2所述的引物组合,其特征在于,所述引物组合中...

【专利技术属性】
技术研发人员:吴志英陶青青金芬芬
申请(专利权)人:绍兴博英诊断技术有限公司
类型:发明
国别省市:

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