LncRNA-ENST00000581911在制备甲状腺相关眼病诊断试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了LncRNA

【技术实现步骤摘要】
LncRNA
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ENST00000581911在制备甲状腺相关眼病诊断试剂中的应用


[0001]本专利技术属于医学领域和分子诊断领域，具体涉及lncRNA
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ENST00000581911在制备甲状腺相关眼病(TAO)诊断试剂中的应用，以及一种辅助TAO早期诊断的lncRNA诊断试剂盒，及其在辅助TAO早期诊断中的应用和检测方法。

技术介绍

[0002]甲状腺相关眼病(TAO)是一种累及眼外肌、眼眶脂肪和眼结缔组织的自身免疫性疾病，发病机制十分复杂，在遗传因素和环境因素的共同作用下，同时涉及多种细胞、细胞因子以及免疫因子，导致免疫功能紊乱。TAO现已成为成人眼球突出的最常见原因，并有逐年升高的趋势。严重者可导致暴露性角膜炎、容貌受损、压迫性视神经病变、视力下降，甚至造成失明。
[0003]目前，临床针对TAO仅限于对症治疗，如激素冲击疗法、眼眶放疗、手术治疗(复视矫正术、眼睑退缩矫正术和眼眶减压术)等，缺乏行而有效的治疗手段，且激素冲击等免疫抑制疗法缺乏针对性且受副作用限制，治疗后易出现反复复发，因此，亟待对TAO的发生进行早期诊断，寻找出新型无创的、高灵敏度和特异性的生物标记物。
[0004]长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200nt不具备蛋白编码功能的RNA分子，可以从多个层面包括表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等调控基因的表达。LncRNA可以调节许多细胞生物学过程，包括细胞增殖、细胞分化和细胞凋亡等，而且lncRNA表达异常与众多人类疾病发生发展密切相关，包括肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病和免疫系统疾病等。近年来研究发现lncRNA RUNX1
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IT1的表达水平改变参与了弥漫性甲状腺毒症(Graves病)的发生和发展(Huang FJ,Liu YL,Wang J et al.LncRNA RUNX1
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IT1affects the differentiation of Th1 cells by regulating NrCAM transcription in Graves'disease.Cell Cycle.2022May；21(9):921
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933.)，中国人群lncRNA
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GAS5基因多态性和lncRNA
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GAS5表达水平与发生系统性红斑狼疮风险密切相关(Liu CH,Lu YL,Huang HT et al.Association of LncRNA
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GAS5 gene polymorphisms and PBMC LncRNA
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GAS5 level with risk of systemic lupus erythematosus in Chinese population.J Cell Mol Med.2021Apr；25(7):3548
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3559.),LncRNA LOC100912373的表达改变与影响了类风湿关节炎的发生(Jiang H,Fan C,Lu YQ et al.Astragaloside regulates lncRNA LOC100912373and the miR
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5p/PDK1 axis to inhibit the proliferation of fibroblast
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like synoviocytes in rats with rheumatoid arthritis.Int J Mol Med.2021Jul；48(1):130.)。
[0005]目前，尚无lncRNA
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ENST00000581911与相关疾病的研究。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的在于提供了LncRNA
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ENST00000581911的新的应用，可作为诊断试剂用
于TAO的早期诊断。
[0007]本专利技术的目的可通过以下技术方案实现:核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的LncRNA
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ENST00000581911在制备诊断TAO试剂盒中的应用，特别是TAO的早期诊断。
[0008]所述诊断试剂包括诊断试剂盒、诊断试纸、诊断芯片。检测样本为眼外肌组织。
[0009]本专利技术的另一个目的在于提供一种TAO诊断的LncRNA
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ENST00000581911检测试剂盒，试剂盒包括RNA抽提体系、RNA反转录反应体系和PCR反应体系，其中PCR反应体系含有特异性扩增SEQ ID NO:1基因序列的引物序列。上述检测试剂盒中RNA抽提体系包括总RNA提取试剂、RNA反转录反应体系包括反转录酶、反转录体系缓冲液和RNA酶抑制剂；PCR反应体系包括扩增系统和引物系统，所述扩增系统由SYBR Premix Ex TaqTM试剂组成；所述引物系统包括RNA反转录随机引物和LncRNA
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ENST00000581911特异性的qRT
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PCR的引物，其中，RNA反转录随机引物为GAPDH和/或Beta
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actin的定量PCR引物序列，GAPDH定量PCR引物序列，上游引物序列如SEQ ID NO:2所示，下游引物序列如SEQ ID NO:3所示；LncRNA
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ENST00000581911特异性的qRT
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PCR的上游引物如SEQ ID NO:4所示，下游引物SEQ ID NO:5所示；Beta
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actin定量PCR引物序列，上游引物序列如SEQ ID NO:6所示，下游引物序列如SEQ ID NO:7所示。
[0010]上述的检测试剂盒，包括：(a)抽提体系1)Trizol reagent，1管，2000μL/管；2)氯仿，1管，500μL/管；3)无水乙醇，1管，8000μL/管；4)DEPC ddH2O，1管，1000μL/管；5)ddH2O，1管，2000μL/管；6)异丙醇，8000μL/管；(b)反转录体系1)总RNA反转录引物(包括Oligo dT和Random 6mers)，1管，浓度:50μM，50μL/管；2)反转录酶(200U/μL)50μL；3)dNTP Mixture(10mM each)50μL；4)反转录buffer 50μL；(c)PCR体系1)SYBR Premix Ex Taq酶；2)buffer 100μL；3)LncRNA
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ENST00000581911特异性qRT
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PCR的上游引物，1管，10μM，100μL/管；LncRNA
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ENST00000581911特异性qRT
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PCR的下游引物，1管，10μM，100μL/管；GAPDH定量PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.LncRNA
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ENST00000581911在制备甲状腺相关眼病诊断试剂中的应用，所述lncRNA
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ENST00000581911的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述诊断试剂包括诊断试剂盒、诊断试纸、诊断芯片。3.一种甲状腺相关眼病诊断的lncRNA检测试剂盒，其特征在于试剂盒包括RNA抽提体系、RNA反转录体系和PCR反应体系；其中PCR反应体系含有特异性扩增根据权利要求1所述SEQ ID NO:1核苷酸序列的引物序列。4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于所述引物序列为lncRNA
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ENST00000581911特异性的荧光实时定量PCR的上下游引物。5.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于所述RNA抽提体系包括RNA抽提试剂；RNA逆转录反应体系包括反转录酶、反转录体系缓冲液和RNA酶抑制剂；PCR反应体系包括扩增系统和引物系统，所述扩增系统为SYBR Premix Ex TaqTM试剂；所述引物系统包括反转录随机引物和lncRNA
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ENST00000581911特异性的qRT
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PCR的引物，其中，RNA反转录随机引物为18S rRNA的定量PCR引物序列，上游引物序列如SEQ ID NO:2所示，下游引物序列如SEQ ID NO:3所示；lncRNA
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ENST00000581911特异性的qRT
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PCR的上游引物如SEQ ID NO:4所示，下游引物如SEQ ID NO:5所示。6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括:(a)抽提体系1)Trizol reagent，1管，2000μL/管；2)氯仿，1管，500μL/管；3)无水乙醇，1管，8000μL/管；4)DEPC ddH2O，1管，1000μL/管...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴联群，周荣妹，赵晨，
申请(专利权)人：复旦大学附属眼耳鼻喉科医院，
类型：发明
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