编码SARS-CoV-2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因、重组质粒制造技术

本发明专利技术公开一种编码SARS

【技术实现步骤摘要】
编码SARS
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CoV
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因、重组质粒


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种编码SARS
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CoV
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因、重组质粒及其制备方法、重组菌株、ORF7a膜外区重组蛋白质及其应用。

技术介绍

[0002][0003]冠状病毒(Coronavirus，CoV)是一种包膜的单链RNA病毒，在人类、及其它哺乳动物和鸟类中广泛传播，能引起呼吸系统、肠、肝及神经系统疾病。已知有7种冠状病毒使人类致病，其中4种如Cov
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229E，Cov
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OC43，Cov
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NL63和Cov
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HKU1在人群中流行，常引起普通感冒症状。另外3种冠状病毒SARS
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CoV，MERS
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CoV和SARS
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CoV
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2具有高度的危险性，会导致严重的肺炎甚至死亡。
[0004]有必要对SARS
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CoV
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2病毒进行研究，SARS
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CoV
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2病毒基因组编码数个与其他已知病毒和非病毒蛋白质没有显著相似性的病毒特征性蛋白。这些蛋白并不是病毒复制所必须的，但可能参与病毒与宿主细胞的相互作用，被称为病毒辅助蛋白。研究发现辅助蛋白质ORF7a是SARS
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CoV
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2病毒粒子表面的蛋白质之一。SARS
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CoV
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2感染者血清中产生高滴度的ORF7a抗体。最新研究发现SARS
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CoV
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2病毒能够利用ORF7a吸附某些细胞表面分子，介导了病毒对某些种类人类细胞的感染，但是目前现有技术没有报道或记载过关于利用辅助蛋白质ORF7a来制备疫苗。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的是提出一种SSARS
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CoV
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因、重组质粒及其制备方法、重组菌株、ORF7a膜外区重组蛋白质及其应用，旨在能够低成本、高效率地制备的ORF7a膜外区重组蛋白质，制备的重组蛋白质能够很好地被ORF7a抗体所识别。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提出一种SARS
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CoV
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因，所述SARS
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CoV
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0007]本专利技术还提出一种重组质粒，所述重组质粒包含如上所述的编码SARS
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CoV
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因，所述重组质粒的表达载体是pPICZα。
[0008]本专利技术还提出一种重组质粒的制备方法，包括以下步骤：
[0009]从基因库中找到编码ORF7a膜外区的核苷酸序列，并进行密码子优化设计，得到ORF7a膜外区基因；
[0010]用限制性内切酶Xho 1和Not 1将带有Kex2位点的ORF7a膜外区基因从pU57载体上切下来，割胶回收切下的DNA片段；
[0011]将所述DNA片段通过T4 DNA连接酶与经过同样酶切的pPICZα载体相连接，得到连接产物；
[0012]将所述连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中，筛选阳性转化子，得到阳性转化子菌落；
[0013]将所述阳性转化子菌落接种至含有博来霉素的LLB培养基培养后，提取质粒，得重组质粒。
[0014]本专利技术还提出一种重组菌株，所述重组菌株包括如上所述的重组质粒。
[0015]可选地，所述重组菌株的宿主细胞包括毕赤酵母。
[0016]本专利技术还提出一种ORF7a膜外区重组蛋白质，所述ORF7a膜外区重组蛋白质由如上所述的重组质粒编码所得，所述ORF7a膜外区重组蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0017]本专利技术还提出一种免疫学检测方法，包括以下步骤：
[0018]采用如上所述的ORF7a膜外区重组蛋白质作为抗原，用来检测SARS
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CoV
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2病毒感染者血清中的ORF7a抗体。
[0019]本专利技术还提出一种如上所述的ORF7a膜外区重组蛋白质作为潜在的SARS
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CoV
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2病毒疫苗的应用。
[0020]本专利技术提供的技术方案中，所述SARS
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CoV
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。将该基因片段构建至表达载体，可以异源表达ORF7a膜外区蛋白质，从而实现低成本、高效率地制备的ORF7a膜外区重组蛋白质，制备的重组蛋白质能够很好地被ORF7a抗体所识别，具备作为抗原用于检测SARS
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CoV
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2感染者血清中抗体的功能；同时，ORF7a重组蛋白质也可以作为一种SARS
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CoV
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2的抗原用于SARS
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CoV
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2免疫接种。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0022]图1为本专利技术实施例1中ORF7a膜外区重组表达的重组质粒构建图；
[0023]图2为本专利技术实施例3中制备的ORF7a膜外区重组蛋白质的蛋白质的凝胶电泳图；
[0024]图3为本专利技术实施例4中ORF7a抗体检测制备的ORF7a膜外区的重组蛋白质的免疫印迹图。
[0025]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0026]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种编码SARS
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因，其特征在于，所述编码SARS
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CoV
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包含如权利要求1所述的编码SARS
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CoV
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2辅助蛋白质ORF7a膜外区的基因，所述重组质粒的表达载体是pPICZα。3.一种如权利要求2所述重组质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：从基因库中找到编码ORF7a膜外区的核苷酸序列，并进行密码子优化设计，得到ORF7a膜外区基因；用限制性内切酶Xho 1和Not 1将带有Kex2位点的ORF7a膜外区基因从pU57载体上切下来，割胶回收切下的DNA片段；将所述DNA片段通过T4 DNA连接酶与经过同样酶切的pPICZα载体相连接，得到连接产物；将所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩正刚，陈丹，丁睿，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：