一种检测血清中甲基化半胱氨酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测血清中甲基化半胱氨酸(Hcy)的方法，属于生物技术和分析测试领域。通过检测血清中游离Hcy浓度xμM，按照公式y＝73.5x+0.919,计算出血清中Hcy总量yμM。利用Hcy核酸适配体，构建倏逝波光纤传感器。传感器对缓冲液中游离Hcy的检出限为8.4fM，对血清中游离Hcy的检出限为0.20nM。对游离Hcy具有极高的特异性，比Hcy浓度高10万倍的人血清白蛋白及各种氨基酸未见交叉响应。所检测到的游离Hcy浓度均为酶循环法测得的总Hcy浓度的1.36％。检测游离Hcy仅需1微升血清，检测时间仅5分钟，传感器可重复使用，成本低。各项性能均显著优于酶循环法，具有极好临床应用价值。具有极好临床应用价值。具有极好临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种检测血清中甲基化半胱氨酸的方法


[0001]本专利技术涉及一种检测血清中甲基化半胱氨酸的方法，属于生物技术和分析测试领域。

技术介绍

[0002]甲基化半胱氨酸(Hcy)是甲硫氨酸代谢产生的中间产物。在人体中，有大约98％
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99％的Hcy通过二硫键与蛋白、氨基酸形成复合物，仅有1％
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2％的Hcy以游离态存在。正常人血清中Hcy总量在5
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15微摩每升(μM)，小于6微摩每升是最佳的数值。临床医学研究表明，Hcy浓度高于正常值，会导致患者患有心血管系统疾病、糖尿病、高血压等疾病的发病率增加。血液中的Hcy浓度与心脑血管疾病具有显著正相关性。因此，Hcy浓度检测已经成为心脑血管类疾病临床诊断和普通人健康体检的一项重要内容。现有检测Hcy的方法主要有高效液相色谱法、放射免疫分析法、酶循环法。其中，高效液相色谱法依赖高昂的仪器设备、熟练的技术人员，因此不便于在基层单位使用。放射免疫分析法需要使用放射性试剂，安全性差。
[0003]目前，最常用的检测Hcy总量的方法是酶循环法。如图1所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测血清中甲基化半胱氨酸的方法，其特征在于，该方法是通过检测血清样本中游离甲基化半胱氨酸的浓度，根据游离甲基化半胱氨酸的浓度和总甲基化半胱氨酸浓度呈线性正相关性，由此计算出血清中甲基化半胱氨酸总量。2.如权利要求1所述的检测血清中甲基化半胱氨酸的方法，其特征在于，通过检测血清样本中游离甲基化半胱氨酸的浓度xμM，按照公式y＝73.5x+0.919,计算出血清中甲基化半胱氨酸总量yμM。3.如权利要求2所述的检测血清中甲基化半胱氨酸的方法，其特征在于，将测试得到的阳性样本相对阴性样本的荧光信号下降百分比代入标准曲线中的拟合方程y＝10.29x+96.5，R2＝0.995，换算得到血清样本中的游离甲基化半胱氨酸浓度，将测得的游离甲基化半胱氨酸浓度作为横坐标，将通过酶循环法测得的总甲基化半胱氨酸浓度作为纵坐标，作图，两者浓度呈线性正相关性，y＝73.5x+0.919，线性相关系数R2为0.9893，测得的游离甲基化半胱氨酸浓度为通过酶循环法测得的总甲基化半胱氨酸浓度的1.36
±
0.09％，因此，通过检测血清中游离甲基化半胱氨酸的浓度xμM，按照公式y＝73.5x+0.919,计算出血清中甲基化半胱氨酸总量yμM。4.如权利要求1或2或3所述的检测血清中甲基化半胱氨酸的方法，其特征在于，检测血清样本中游离甲基化半胱氨酸的浓度的步骤如下：缓冲液A为50mM 4
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羟乙基哌嗪乙磺酸、100mM氯化钠、1mM氯化镁、20mM氯化钾、1mM氯化钙，pH 7.4，仅用缓冲液A将血清样本稀释1万倍即可，无需血清样本前处理，然后将其与20nM的荧光基团Cy 5.5标记的甲基化半胱氨酸核酸适配体的互补链c
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Hcy40
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Cy 5.5：GATGCCTGTGAA
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Cy5.5混合、孵育后，经过以下三个步骤将混合物引入倏逝波光纤传感系统。步骤1：泵入缓冲液A 30秒清洗进样管道和光纤反应池，保证基线平稳；步骤2：将血清样本和c
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Hcy 40
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【专利技术属性】
技术研发人员：娄新徽，周建硕，赵家兴，
申请(专利权)人：首都师范大学，
类型：发明
国别省市：