一种光电化学生物适配体传感器检测狂犬病病毒的方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种光电化学生物适配体传感器检测狂犬病病毒的方法和应用，该适配体传感器通过以下步骤制备所得：通过静电吸附将CdTe QDs组装在碳掺杂的TiO2纳米颗粒电极的表面上；将NH2‑

【技术实现步骤摘要】
一种光电化学生物适配体传感器检测狂犬病病毒的方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种狂犬病病毒检测方法，具体涉及一种光电化学生物适配体传感器检测狂犬病病毒的方法和应用。

技术介绍

[0002]狂犬病是一种急性人畜共患疾病，死亡率几乎达到100％。狂犬病快速诊断是预防和控制狂犬病的重要步骤，目前，其检测方法包括常规的检测方法以及核酸诊断法，其中，常规方法包括直接荧光抗体检测(direct fluorescent antibody test，DFAT)和小鼠接种检测(mouse inoculation test，MIT)。DFAT具有高灵敏度和特异性，但需要训练有素的人员和昂贵的荧光显微镜。当脑组织开始分解时，DFAT也可能产生假阴性结果。MIT需要动物设施以及良好的收容设施，最主要的缺点是获得结果延迟，甚至可能需要4周。因此，迫切需要开发用于狂犬病病毒核酸诊断的方法。
[0003]病毒RNA定量PCR检测是确认是否是RABV阴性结果的另一种方法。病毒RNA可以通过定量PCR进行有效定量，例如逆转录聚合酶链反应(RT<br/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测狂犬病病毒的光电化学生物适配体传感器，其特征在于：通过以下步骤制备所得：通过静电吸附将CdTe QDs组装在碳掺杂的TiO2纳米颗粒电极的表面上；将NH2‑
RNA
‑
SH/Au NPs通过CdTe QDs上的羰基与探针的氨基之间的经典EDC偶联反应固定在TiO2：C
‑
NP/CdTe电极上，从而构建成适配体传感器TiO2：C
‑
NP/CdTe/AuNPs/PRNA；紧接着用单乙醇胺阻断电极表面的未结合位点以避免非特异结合而产生假阳性。2.如权利要求1所述的一种检测狂犬病病毒的光电化学生物适配体传感器，其特征在于：具体包括如下步骤：S1、CdTe QDs的合成首先往250mL三口烧瓶加入120mL超纯水，接着加入0.137g的CdCl2和89μL MPA，通入氩气搅拌，逐滴加入1.0M NaOH使pH达到11.8，继续通氩气彻底除氧，加入120mg NaBH4和0.0133g Na2TeO3，此时摩尔比Cd
2+
∶Te2‑
∶MPA＝1∶0.1∶1.7；所得溶液在氩气保护下100℃油浴回流3h，12000rpm离心10min，纯化3次，终液经除氧后保存于4℃冰箱中；S2、ITO导电玻璃前处理将ITO导电玻璃置于丙酮溶液中超声15min后，放入NaOH溶液中超声15min，彻底除去有机物，然后置于去离子水超声15min，再用去离子水清洗5遍，再去离子水超声15min，去离子水清洗5遍；90℃氩气氛中干燥6小时，冷却，备用；S3、TiO2：C
‑
NPs/CdTe电极的制备将4mg TiO2：C
‑
NPs粉末超声分散于2mL去离子水中，制备成浓度为2.0mg/mL的TiO2：C
‑
NPs悬浮液；用移液器定量吸取20μL TiO2：C
‑
NPs悬浮液，从ITO玻璃的一端滴入，稍微倾斜混匀，让TiO2：C
‑
NPs悬浮液均匀涂布在为0.5cm
×
0.5cm的ITO电极上，室温干燥后，在马弗炉中450℃煅烧30min，静置于超净工作台上缓慢冷却至室温，获得所需的TiO2：C
‑
NPs/ITO电极；然后，将TiO2：C
‑
NPs电极浸泡在1wt％的PDDA溶液中2min，继而用灭菌蒸馏水缓慢浸泡清洗；接着用培养皿装CdTe QDs，将电极放入其中浸泡10min，用灭菌蒸馏水缓慢浸泡清洗，用灭菌吸水纸吸掉多余水，90℃干燥箱中将电极干燥，此时得到CdTe附着的电极，如此反复四次即可得到TiO2：C
‑
NPs/CdTe电极；S4、Au/SH
‑
pRNA
‑
NH2的制备用10μL的10mM TCEP激活280μL的10μM pRNA探针1h，以破坏巯基官能化的pRNA之间的二硫键；然后，将1000μL纯化的Au NPs溶液添加到pRNA探针溶液中，并在黑暗中振摇孵育20小时；之后，将50μL的0.1mM MCH注入上述溶液中，并继续摇动孵育2小时，离心数次后，获得所需的Au NPs
‑
p RNA共轭物；S5、适配体传感器的构建室温下将含有20mM EDC和10mM NHS的混合液25uL滴加到CdTe QDs修饰的电极进行激活，30min后，用去离子水缓慢冲洗，然后用Tris
‑
HCl缓冲液(10mM，pH7.4)冲洗以去除多余的水，并在60℃烘箱中烘干30min；将20μL的1μM NH2‑
RNA
‑
SH
‑
Au NP滴到电极表面，并在4℃下孵育过夜，而后用Tris
‑
HCl缓冲液冲洗电极以去除未结合的NH2‑
RNA
‑
SH
‑
AuNP；在室温下用20μL 1mM MEA封闭电极1h，并用Tris
‑
HCl缓冲液彻底冲洗。3.如权利要求1所述的一种检测狂犬病病毒的光电化学生物适配体传感器的应用，其
特征在于：其可用于实现狂犬病病毒的检测。4.如权利要求3所述的一种检测狂犬病病毒的光电化学生物适配体传感器的应用，其特征在于：将所得的光电化学适配体传感器与20μL不同浓度的病毒在37℃孵育1小时，然后，在培养皿中用Tris
‑
HCl缓冲液缓慢冲洗电极，此时肉眼可见电极上密布附着物，紧接着便可以进行光电流的检测；光电流检测时，采用抗坏血酸作为光电电流信号检测体系的电子供体，抗坏血溶液经氩气除氧使用，光源：波长为460nm的光，开/关光源间隔10s/次，光电化学系统外加电压为0.0V。5.一种狂...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖艳娟，罗廷荣，李晓宁，蔡宗伶，栗朵朵，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：