一种三叉苦提取物在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种三叉苦提取物特别是总黄酮在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用。本发明专利技术提供三叉苦在制备治疗脓毒症相关性脑病中的应用，为其治疗药物的研发提供新的思路。三叉苦容易得到，可带动药材资源充分开发和利用，从而带来有益效果。从而带来有益效果。从而带来有益效果。

【技术实现步骤摘要】
一种三叉苦提取物在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用


[0001]本专利技术涉及一种治疗脓毒症致脑损伤药物，特别是三叉苦总黄酮(Melicope pteleifolia totalflavone，MPTF)在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用。

技术介绍

[0002]脓毒症相关性脑病是由脓毒症所引起的中枢神经系统功能障碍，是ICU病房中常见脑病之一。脓毒症相关性脑病可发生在脓毒症病程的任何时期，临床上表现为从谵妄到深度昏迷的脑功能紊乱。脓毒症相关性脑病以行为、认知、觉醒和意识改变为特征，且在相当部分患者中存在长期认知功能障。在ICU病房中，其发病率为9％～71％，目前尚无有效的治疗手段，临床上主要是针对基础疾病脓毒症进行整体治疗、对症治疗以及支持治疗。
[0003]三叉苦拉丁学名Melicopepteleifolia，芸香科植物，广泛分布于中国南方诸省如广东、福建、海南、广西、云南、贵州等省区。其性味苦寒，具有清热解毒、祛风除湿之功效。药理学研究表明，三叉苦提取物或从中分离得到的化合物具有抗炎、抗氧化、抗菌等作用。研究表明，炎症、氧化应激等因素参与脓毒症相关性脑病的病程。但到目前为止，尚未见三叉苦治疗脓毒症相关性脑病的研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于，提供三叉苦总黄酮(Melicopepteleifolia total flavonoids,MPTF)在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用，为脓毒症相关性脑病治疗药物的研发提供新的思路，三叉苦易得，可带动药材资源的充分开发和利用。
[0005]本专利技术的技术方案：三叉苦提取物在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用。
[0006]前述三叉苦提取物在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用，所述三叉苦提取物为三叉苦总黄酮。
[0007]前述的三叉苦提取物在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用，所述三叉苦总黄酮的制备方法按照以下步骤进行：
[0008](1)将三叉苦叶粉碎过筛后，加95％乙醇浸泡过夜，用旋转蒸发仪减压浓缩，得到A品；
[0009](2)取A品上经95％乙醇预处理的HPD
‑
100型号大孔树脂柱，上样体积4300mL，用3500mL蒸馏水洗脱，然后用70％乙醇4500mL冲洗柱子，收集70％乙醇过柱馏分，得B品；
[0010](3)取B品重复步骤(2)一次，收集70％乙醇过柱馏分，蒸干得三叉苦总黄酮浸膏粉末。
[0011]前述步骤(1)中，三叉苦与95％乙醇的重量比约为1:5
‑
10，所述滤液减压浓缩至原体积的1/5
‑
1/4。
[0012]前述步骤(1)中，旋转蒸发仪减压至400～600毫米汞柱。
[0013]一种治疗脓毒症相关性脑病的药物，所述药物原料中包含三叉苦总黄酮。
[0014]一种治疗脓毒症相关性脑病的药物，所述药物主要由三叉苦总黄酮制备得到。
[0015]前述治疗脓毒症相关性脑病药物的制备方法，取三叉苦总黄酮，与药物中可接受的辅料进行组合，按照常规方法进行加工，制成相应的药物。
[0016]前述药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或口服液。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0018]1、到目前为止，人们对于脓毒症相关性脑病的发病机制还未清楚，因此还没有研发出有效治疗脓毒症相关性脑病药物。本专利技术发现，三叉苦总黄酮可以用于脓毒症相关性脑病的治疗，如本专利技术的后续实验证明中所示：体外，三叉苦总黄酮(14.5μg/ml)体外明显保护LPS(50ng/ml)联合INF
‑
γ(200U/ml)刺激的大鼠皮质星形胶质细胞。
[0019]2、体内，与CLP模型组比较，三叉苦总黄酮(30、60mg/kg)明显增加脓毒症小鼠生存数量，差异具有统计学意义。与CLP组比较，三叉苦总黄酮(60mg/kg)明显减轻脓毒症小鼠脑组织损伤，减少炎性浸润，维持细胞正常结构等。
[0020]3、在存活脓毒症小鼠中，相对于地塞米松组，三叉苦总黄酮组中未发现一例小鼠出现脓毒症相关性脑病症状。
[0021]目前现有技术中尚没有把三叉苦应用于脓毒症相关性脑病的治疗，因此，无法认识到将其作为药物研究其临床价值。本专利技术通过以下实验，证明三叉苦能用于治疗脓毒症相关性脑病。
[0022]实验证明：
[0023]1MPTF的提取、纯化
[0024]1.1大孔树脂预处理
[0025]HPD
‑
100型号大孔树脂，采用95％乙醇浸泡过夜，用95％乙醇洗至无浑浊现象，用蒸馏水洗至无醇味，采用湿法上柱，柱高52cm，直径9.3cm柱体积(BV)，3530.52cm3。
[0026]1.2提取
[0027]称取1.1kg三叉苦原药材，采用上述方法制备总黄酮提取液，用旋转蒸发仪浓缩至无醇味，上样总体积4300ml(1.2BV)，用3500ml蒸馏水洗脱，然后用70％乙醇(4500ml，1.3BV)以2BV/h冲洗柱子，收集70％乙醇过柱馏分，得第一次过柱样品，然后将第一次得到样品根据上述方法进行第二遍纯化。
[0028]2纯化样品总黄酮含量测定
[0029]第二次纯化样品，浓缩蒸干，得总黄酮浸膏粉末，取0.1222g样品，采用200ml 70％乙醇溶解，从中取0.5ml置于有塞试管中，参照Na2NO2‑
Al(NO3)3‑
NaOH显色法测定总黄酮含量。
[0030]根据标准曲线和公式Y(％)＝[(cV*10
‑3)D/m]*100，计算得出样品总黄酮含量为81.3％。
[0031]Y为三叉苦总黄酮含量，mg/g；C为试样的测定质量浓度，mg/mL；V为滤液体积，mL；D为稀释倍数；m为原料质量，平行称量三叉苦总黄酮样品1.1546g、1.1593g，分别命名为ZHT
‑
1、ZHT
‑
2，根据标准曲线与吸光度关系计算得到二者含量(表2)。
[0032]表1.标曲浓度与吸光度
[0033][0034]表2.样品浓度与吸光度
[0035][0036]3HPLC分析MPTF
[0037]取适量MPTF样品，用于HPLC分析。实验条件：Agilent C18柱(250mm
×
4.6mm,5μm)，柱温30℃，检测波长240nm，流速1ml/min，进样量2μl，流动相：甲醇/水。
[0038]结果表明，在18min时HPLC图谱上有一明显且单一出峰，经分析为三叉苦总黄酮(图1)。
[0039]4细胞实验
[0040]4.1MPTF对大鼠皮质星形胶质细胞的毒性作用
[0041]采用CCK
‑
8法测定不同浓度三叉苦总黄酮对大鼠皮质星形胶质细胞的毒性。细胞毒作用实验中三叉苦总黄酮的给药浓度分别为232、116、58、29、14.5、7.25μg/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三叉苦提取物在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用。2.根据权利要求1所述三叉苦提取物在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用，其特征在于：所述三叉苦提取物为三叉苦总黄酮。3.根据权利要求2所述的三叉苦总黄酮在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用，其特征在于：所述三叉苦总黄酮的制备方法按照以下步骤进行：(1)将三叉苦叶粉碎过筛后，加95％乙醇浸泡过夜，用旋转蒸发仪减压浓缩，得到A品；(2)取A品上经95％乙醇预处理的HPD
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100型号大孔树脂柱，上样体积4300mL，用3500mL蒸馏水洗脱，然后用70％乙醇4500mL冲洗柱子，收集70％乙醇过柱馏分，得B品；(3)取B品重复步骤(2)一次，收集70％乙醇过柱馏分，蒸干得三叉苦总黄酮浸膏粉末。4.根据权利要求3所述的三叉苦总黄酮在制备治疗脓毒症相关性脑病药物中的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：高英，姚琦，谢丽，霍晶晶，陈阳，
申请(专利权)人：云南省第一人民医院，
类型：发明
国别省市：