西伯利亚杏开花基因PsSOC1-like及其检测方法、过表达载体构建方法和应用技术

技术编号：37617914 阅读：8 留言：0更新日期：2023-05-18 12:09

本发明专利技术公开西伯利亚杏开花基因PsSOC1

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【技术实现步骤摘要】
西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like及其检测方法、过表达载体构建方法和应用

[0001]本专利技术涉及植物开花时间调节
具体地说是西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like及其检测方法、过表达载体构建方法和应用。

技术介绍

[0002]西伯利亚杏(Prunus sibirica)，属蔷薇科(Rosaceae)李亚科(Prunoideae)杏属(Armeniaca Mill.)植物，是我国北方地区重要的经济树种，具有较高的经济价值和营养价值。杏仁含有丰富的蛋白质和脂肪，其蛋白质含量可达34％，含油率可达60％，可榨油或加工成食品与饮料。西伯利亚杏苦杏仁苷含量3.5％
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7.6％，主要作为传统中药使用。同时，西伯利亚杏还具水土保持、抗旱、抗寒、耐贫瘠等特点，是干旱、半干旱区生态建设的优选树种。但是西伯利亚杏由于花期早，易受倒春寒影响，导致其产量大幅下降，使西伯利亚杏的发展受到阻碍。
[0003]到目前为止，共发现了5条植物开花调控途径，分别为光周期途径(Photoperiod pathway)、自主途径(Autonomous pathway)、春化途径(Vernalization pathway)、赤霉素途径(Gibberellin pathway，GApathway)和自身年龄途径(Age pathway)，这些途径产生的不同信号因子将传递给开花整合因子，经开花整合因子整合信号后，对花器官的发育进行调控，最后诱导开花。在植物开花整合基因中，SU...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like，其特征在于，包含如下任意一类核苷酸序列中的任意一种核苷酸序列：(a)类核苷酸序列：包含PsSOC1
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1基因、PsSOC1
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2基因和PsSOC1
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3基因中的至少一种基因序列的核苷酸序列；PsSOC1
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1基因序列如序列表Seq ID NO.1所示，PsSOC1
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2基因序列如序列表Seq ID NO.2所示，PsSOC1
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3基因序列如序列表Seq ID NO.3所示；(b)类核苷酸序列：与(a)类核苷酸序列互补的核苷酸序列；(c)类核苷酸序列：与(a)类核苷酸序列具有同源性，且同源性大于或等于50％的核苷酸序列；(d)类核苷酸序列：与(a)类核苷酸序列编码相同氨基酸序列的蛋白质的核苷酸序列；(e)类核苷酸序列：编码如序列表Seq ID NO.4、Seq ID NO.5和Seq ID NO.6中所示的至少一种氨基酸序列的核苷酸序列；或者由于至少一个氨基酸残基的替代、缺失或插入而导致编码的氨基酸序列与序列表Seq IDNO.4、Seq ID NO.5和Seq ID NO.6所示的氨基酸序列不同的核苷酸序列；或者编码的氨基酸序列与如序列表Seq ID NO.4、Seq ID NO.5和Seq ID NO.6中所示的至少一种氨基酸序列同源性大于或等于50％的核苷酸序列；(f)类核苷酸序列：为(a)类核苷酸序列、(b)类核苷酸序列、(c)类核苷酸序列、(d)类核苷酸序列和(e)类核苷酸序列中，任意一种核苷酸序列的活性片段；(g)类核苷酸序列：为与(c)类核苷酸序列、(d)类核苷酸序列、(e)类核苷酸序列或(f)类核苷酸序列互补的核苷酸序列。2.西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤(A
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1)、取含有如权利要求1所述的西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like的西伯利亚杏的植物组织至液氮中进行研磨，并通过试剂盒提取总RNA；步骤(A
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2)、根据提取得到的总RNA反转录得到全长cDNA；步骤(A
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3)、以全长cDNA为模板，利用西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like的上游引物和下游引物进行PCR或qRT
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PCR扩增；步骤(A
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4)、扩增结束后，对PCR产物进行定性或定量检测。3.根据权利要求2所述的西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like的检测方法，其特征在于，定性检测时：PsSOC1
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1基因通过序列表Seq ID NO.7中的上游引物和序列表Seq ID NO.8中的下游引物进行PCR反应扩增；PsSOC1
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2通过序列表Seq ID NO.9中的上游引物和序列表Seq ID NO.10中的下游引物进行PCR反应扩增；PsSOC1
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3通过序列表Seq ID NO.11中的上游引物和序列表Seq ID NO.12中的下游引物进行PCR反应扩增；定量检测时：PsSOC1
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1基因通过序列表Seq ID NO.13中的上游引物和序列表Seq ID NO.14中的下游引物进行qRT
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PCR；PsSOC1
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2通过序列表Seq ID NO.15中的上游引物和序列表Seq ID NO.16中的下游引物进行qRT
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PCR；PsSOC1
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3通过序列表Seq ID NO.17中的上游引物和序列表Seq IDNO.18中的下游引物进行qRT
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PCR。4.根据权利要求2所述的西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like的检测方法，其特征在于，对于PCR扩增：PCR反应总体系的体积为20μL，由cDNA 2μL、上游引物1.0μL、下游引物1.0μL、2
×
Taq Master Mix酶12.5μL和余量的ddH2O组成；PCR扩增程序为：94℃预变性1.5min，94℃变性20s，52℃退火30s，72℃延伸1min，进行30个循环；72℃延伸5min后4℃保存；对于qRT
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PCR：qRT
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PCR内参为西伯利亚杏18s基因和拟南芥TUB2基因；qRT
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PCR的反应
体系的总体积为20μL，由cDNA 1.0μL、上游引物1.0μL、下游引物1.0μL、2
×
SYBR Green qPCR Premix 10μL和余量的ddH2O；PCR的反应程序为：扩增循环：95℃热启动30s，95℃进行10s，60℃进行30s，进行40个循环；熔解程序：扩增循环结束后，60℃升温至95℃，升温5℃/s；每个反应进行4个重复。5.西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like过表达载体的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤(B
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1)、取含有如权利要求1所述的西伯利亚杏开花基因PsSOC1
‑
like的西伯利亚杏的幼嫩叶片至液氮中进行研磨，并通过试剂盒提取总RNA；步骤(B
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2)、根据提取得到的总RNA反转录得到全长cDNA；步骤(B
‑
3)、以全长cDNA为模板，利用西伯利亚杏开花基因PsSOC1
‑
like的上游引物和下游引物进行PCR扩增；步骤(B
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4)、扩增结束后，对PCR产物进行凝胶电泳并回收，再将回收的PCR产物交换到入门载体中，获得重组入门载体；步骤(B
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5)提取重组入门载体的质粒，并将质粒中的PsSOC1
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like基因片段交换至植物表达载体中，即获取得到西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like过表达载体。6.根据权利要求5所述的西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like过表达载体的构建方法，其特征在于，步骤(B
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3)中，PsSOC1
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1基因的上游引物为序列表Seq ID NO.19中的核苷酸序列，PsSOC1
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1基因的下游引物为序列表Seq ID NO.20中的核苷酸序列；PsSOC1
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2基因的上游引物为序列表Seq ID NO.21中的核苷酸序列，PsSOC1
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2基因的下游引物为序列表Seq ID NO.22中的核苷酸序列；PsSOC1
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3基因的上游引物为序列表Seq ID NO.23中的核苷酸序列，PsSOC1
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3基因的下游引物为序列表Seq ID NO.24中的核苷酸序列。7.根据权利要求5所述的西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like过表达载体的构建方法，其特征在于，步骤(B
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4)中，PCR产物通过Gateway BP Clonase反应交换到Gateway系统的入门载体pDONR207中，获得重组入门载体；步骤(B
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5)中，提取重组入门载体的pDONR207
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PsSOC1
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like质粒，使用Gateway LR Clonase系统将PsSOC1
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like基因片段交换到植物表达载体pMDC32中，构建得到重组质粒pMDC32
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PsSOC1
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like即为西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like过表达载体。8.根据权利要求7所述的西伯利亚杏开花基因PsSOC1
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like过表达载体的构建方法，其特征在于，步骤(B
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3)中，PCR扩增时，PCR反应总体系的体积为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王淋，蔺悦，包文泉，敖敦，陈俊兴，乌云塔娜，徐宛玉，陈一潇，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院经济林研究所，
类型：发明
国别省市：

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