一株耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体及其应用。本发明专利技术用双层琼脂法从西南医院污水中分离到一株新噬菌体，该噬菌体能够裂解92.59％(25/27)的耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌临床菌株。透射电镜照片显示该噬菌体具有对称的头部和短尾，表明该噬菌体属于短尾噬菌体科。其潜伏期约为10分钟，爆发量约为200PFU/cell，在pH值4.0

【技术实现步骤摘要】
一株耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体及其应用


[0001]本专利技术涉及病毒学领域，尤其涉及一株耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌的裂解性噬菌体及其应用。

技术介绍

[0002]抗生素耐药(ant imicrobia l res i stance，AMR)对全球的公共卫生事业带来了巨大挑战，目前临床上革兰氏阴性菌的耐药情况尤为严重，特别是碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(carbapenem
‑
res i stant Enterobacter iaceae，CRE)引起的感染，带来了死亡率的增高、住院时间的延长以及治疗费用的增加，给医患双方造成巨大压力。
[0003]在我国，CRE中最常见的是耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem
‑
res i stant Klebs ie l l a pneumon iae，CRKP)。CRKP几乎对所有一线抗生素都耐药，往往引起难以治愈甚至危及生命的感染。高毒力(高黏性)肺炎克雷伯菌可在健康人群中引起严重的感染，如肝脓肿、脑膜炎。耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌(carbapenem
‑
res i stant hypermucovi scous Klebs ie l l a pneumon iae，CR
‑
HMKP)的出现和增加可能会导致更严重、更复杂的公共卫生问题。
[0004]噬菌体是一种可以感染细菌、真菌等微生物的病毒，约在100年前被发现，并被用于治疗感染性疾病，目前随着抗菌药物逐渐失去作用，PT(phage type噬菌体型)又重新回到科研工作者的视野。噬菌体广泛存在于自然环境，土壤、海洋、污水中都有数量庞大、种类繁多的噬菌体，为我们提供了一个巨大的噬菌体库。被用作抗菌剂的噬菌体具有一些独特的优点，例如，能够精准高效地杀死细菌、能够自我复制、对正常菌群干扰小、无明显副作用、易于获得、抗生物膜。历史上已经有许多动物实验、人体实验证明了噬菌体疗法的安全性和有效性。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一株耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体，以期治疗耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌引起的血流感染。
[0006]本专利技术提供的一株耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体，所述噬菌体有一个立体对称的多面体头部，包裹着核酸，有尾鞘，颈部连着头部和尾部，具有一个短的、非收缩性的尾，属于有尾噬菌体目Caudovi ra les短尾噬菌体科Podovi r idae。
[0007]进一步，所述多面体头部直径约42nm。
[0008]进一步，所述噬菌体滴度在4℃到45℃范围内保持稳定，当温度超过50℃时滴度开始下降，温度高于60℃时滴度迅速下降，70℃时被完全灭活。
[0009]进一步，所述噬菌体当pH值在4到11之间时滴度保持稳定，在pH＝2极酸环境下完全灭活。
[0010]进一步，所述噬菌体是具有多糖解聚酶活性的裂解性噬菌体。
[0011]进一步，所述噬菌体尾丝蛋白有2个结构域，其中一个与尾刺蛋白4结构相似，另一个与半乳糖醛酸酶或β
‑
1，3
‑
葡聚糖酶结构相似。
[0012]本专利技术还提供所述耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体在制备预防和/或治疗肺炎克雷伯菌引起的疾病的药物中的用途。
[0013]本专利技术还提供所述耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体在制备预防和/或治疗肺炎克雷伯菌引起的疾病的饲料中的用途。
[0014]本专利技术还提供用于防治耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌的杀菌组合物，包括有效量的如上所述的肺炎克雷伯菌噬菌体。
[0015]本专利技术还提供一种清洁剂或消毒剂，包括上述肺炎克雷伯菌噬菌体。
[0016]所述噬菌体kpssk3与噬菌体SH
‑
Kp 152410两者的平均核苷酸一致性为93.39％。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0018](1)本专利技术用双层琼脂法从西南医院污水中，以肺炎克雷伯菌株NY03为宿主，分离到一株新噬菌体，该噬菌体能够裂解92.59％(25/27)的耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌临床菌株。透射电镜照片显示该噬菌体具有对称的头部和短尾，表明该噬菌体属于短尾噬菌体科，其潜伏期约为10分钟，爆发量约为200PFU/ce l l，在pH值4.0
‑
11.0、温度4
‑
45℃的环境中，噬菌体的滴度维持稳定，其基因组为线性dsDNA，全长40539bp，包含42个开放阅读框，未发现携带耐药基因、毒力基因或编码rRNA、tRNA、整合酶基因。该噬菌体有望在耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌血流感染中发挥治疗潜能。
[0019](2)耐碳青霉烯类高黏性肺炎克雷伯菌CR
‑
HMKP菌株对绝大多数抗菌药物的耐药率均超过70％,呈高度耐药性,其治疗措施非常有限,甚至无药可用,因此CR
‑
HMKP患者的临床死亡率较高,预后较差,这已经成为了威胁临床住院患者预后的主要因素之一。本专利技术所提供的肺炎克雷伯菌噬菌体在治疗感染耐碳青霉烯类高黏性肺炎克雷伯菌后的疾病具有很好的优势，效价较高，防治效果好。
[0020](3)本专利技术所提供的耐碳青霉烯类高黏性肺炎克雷伯菌噬菌体在防控禽类致病性变形杆菌所致扩散性传播中具有良好的应用前景。
附图说明
[0021]本专利技术上述的以及其他的特征、性质和优势将通过下面结合附图和实施例的描述而变得更加明显。
[0022]图1为本专利技术中肺炎克雷伯菌菌株NY03的拉丝实验结果(阳性)；
[0023]图2为本专利技术噬菌斑与周围半透明晕圈；
[0024]图3为本专利技术电镜下的kpssk3的形态；
[0025]图4为本专利技术噬菌体kpssk3的一步生长曲线；
[0026]图5为本专利技术kpssk3的温度稳定性(A)和酸碱稳定性(B)；
[0027]图6为本专利技术预测的kpssk3尾丝蛋白的结构；
[0028]图7为本专利技术基于主要衣壳蛋白构建的进化树。
具体实施方式
[0029]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。以下实施例将有助于本领域的技
术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。
[0030]实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0031]实施例1.肺炎克雷伯菌株NY03的获取与高黏表型的检测
[0032]肺炎克雷伯菌株NY03于2017年分离自西南医院烧伤研究所一名15岁的男性烧伤患者的血液样本，并最终导致该患者死于脓毒性休克。该菌株于烧伤研究本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体，其特征在于，所述噬菌体有一个立体对称的多面体头部，包裹着核酸，有尾鞘，颈部连着头部和尾部，具有一个短的、非收缩性的尾，属于有尾噬菌体目Caudovirales短尾噬菌体科Podoviridae。2.根据权利要求1所述耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体，其特征在于，所述多面体头部直径约42nm。3.根据权利要求1所述耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体，其特征在于，所述噬菌体滴度在4℃到45℃范围内保持稳定，当温度超过50℃时滴度开始下降，温度高于60℃时滴度迅速下降，70℃时被完全灭活。4.根据权利要求1所述耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体，其特征在于，所述噬菌体当pH值在4到11之间时滴度保持稳定，在pH＝2极酸环境下完全灭活。5.根据权利要求1所述耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌裂解性...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚雅利，石云龙，彭源，袁志强，杨子晨，梁振，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：