一种基于CRISPR/Cas12a检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR/Cas12a检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用，所述试剂盒包含RPA扩增试剂和CRISPR/Cas12a检测试剂。本发明专利技术还公开了一种使用所述的现场可视化试剂盒检测单增李斯特菌的方法，所有试剂放在同一离心管中进行检测，操作简单，避免了样品及环境污染。利用本发明专利技术的试剂盒及检测方法进行单增李斯特菌的检测，可以实现37℃条件下恒温检测，大幅降低RPA反应体积，可以实现在25分钟内对4.4CFU/g的细菌检测，结果实现可视化。本发明专利技术的方法具有降低RPA体系损耗，扩增体系与检测体系完全分离、避免交叉污染、结果可视化等优点。视化等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR/Cas12a检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用


[0001]本专利技术涉及一种用于检测单增李斯特菌的CRISPR/Cas12a现场可视化试剂盒及应用，属于分子生物学诊断


技术介绍

[0002]单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes),简称单增李斯特菌，是重要的食源性致病菌，其在低温下的耐受性和生长能力是该病原体的显著特征之一。这种病原体可在许多物体表面形成生物膜且不易清除，在4℃环境中也能生长，是冷藏食品的主要污染菌。人类李斯特菌病是由食用被单核增生李斯特菌污染的食品引起的。大多数人摄入高度污染的食物可导致轻至严重的胃肠炎，症状包括腹泻、腹痛、发烧、呕吐、轻微和流感样疾病。
[0003]目前我国对单增李斯特菌的检测包括细菌学、免疫学和分子生物学。细菌学是金标准但费时费力、免疫学检测对非富集食品病原菌检测灵敏度不高。而单增李斯特菌在食品中的浓度极低，对于检测技术的灵敏度有较高要求。随着分子生物学技术的发展，包括PCR、LAMP、RPA在内的核酸扩增方法逐步用于单增李斯特菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas12a检测单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的现场可视化试剂盒，其特征在于，所述的现场可视化试剂盒包含以下组分：RPA扩增试剂和CRISPR/Cas12a检测试剂；其中，所述RPA扩增试剂中包括RPA扩增引物对，所述的RPA扩增引物对由SEQ ID No.1所示的上游引物和SEQ ID No.2所示的下游引物组成；其中，所述CRISPR/Cas12a检测试剂中包括LbCas12a，crRNA，NEBuffer3.1以及ssDNA荧光报告物，所述的crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.如权利要求1所述的现场可视化试剂盒，其特征在于，所述的RPA扩增试剂中还包括RPABasic冻干粉，RPA反应缓冲液，MgOAc以及DEPC水。3.权利要求1或2所述的现场可视化试剂盒在检测单增李斯特菌中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的现场可视化试剂盒用于检测食品或环境中存在的单增李斯特菌。5.一种使用权利要求1或2所述的现场可视化试剂盒检测食品或环境中存在的单增李斯特菌的方法，包括以下步骤：(1)采用水煮法提取单增李斯特菌中的基因组DNA；(2)在离心管底部放...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢士英，肖毅然，任洪林，李香荷，王菡，胡盼，李岩松，柳增善，王聪，郭禹汐，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：